[发明专利]一种酶解卵白蛋白的方法及酶解产物的应用

摘要

本发明公开了一种酶解卵白蛋白的方法，包括如下步骤，(1)将卵白蛋白、木瓜肽酶、L‑半胱氨酸、蒸馏水均匀混合，进行酶解反应,木瓜肽酶的氨基酸序列是如SEQ ID NO1所示的序列；(2)对(1)步酶解后的混合物加热，过滤去除未酶解的卵白蛋白残渣；(3)对步骤(2)处理后的酶解产物进行灭菌即可。本发明的优点在于，木瓜乳汁中简便、低成本、高纯度地提取出了木瓜肽酶，并且木瓜肽酶是一种天然生物活性物质，采用该肽酶对卵白蛋白进行酶解，能够得到分子量约为500‑1000的小分子寡肽和氨基酸，酶解率高，并且得到的小分子寡肽和氨基酸可以作为制备治疗肝病的药物使用，也能够进一步促进机体和皮肤的吸收。

主权项

一种酶解卵白蛋白的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，(1)将卵白蛋白、木瓜肽酶、L‑半胱氨酸、蒸馏水均匀混合，进行酶解反应，木瓜肽酶的氨基酸序列是如SEQ IDNO：1 所示的序列；(2)对步骤(1)酶解后的混合物加热，过滤去除未酶解的卵白蛋白残渣；(3)对步骤(2)处理后的酶解产物进行灭菌即可；步骤(1)提取木瓜肽酶的方法为：①将木瓜粉溶解于 0. 1M 醋酸‑醋酸钠缓冲溶液中；②向①步混合液中加入硫酸铵，使混合液的饱和度达到 0. 45，放置 12‑16h 后抽滤，将上清液体用质量浓度 0. lM NaCl 溶液透析；③将②步得到的透析液上柱 CM‑Sepharose，然后用质量浓度为 0.05 ‑1.0M NaCl 溶液进行梯度洗脱，收集最后流出的液体；④向③步得到的液体加入硫酸铵直至溶液饱和度达到 0. 85，放置 12‑16h 后抽滤，将得到的沉淀用质量浓度 0. 05M NaCl 溶液透析；将透析液冷冻干燥即可得到木瓜肽酶粉末；步骤(1)中卵白蛋白、木瓜肽酶、L‑半胱氦酸、蒸馏水的质量比为 100：5‑10：1‑2.5：2000；步骤(1)中酶解温度为 45‑65℃，酶解 pH 为 6‑7，酶解时间为 12‑24h；步骤(2)去除未酶解的卵白蛋白残渣的具体方法为，酶解后将温度加热至 90‑100℃变性 5‑10 分钟，将酶解产物过滤，得到上清液；步骤(3)灭菌的具体方法为，向经步骤(2)处理后的酶解产物中加入质量浓度为 0.02‑0.05%的抗氧化剂，搅拌均匀后，在温度为 121‑125℃条件下进行湿热灭菌，所采用的抗氧化剂为维生素 C 与焦亚硫酸钠按照质量配比 10：0. 5‑1 的混合物。