[发明专利]一种酶解卵白蛋白的方法及酶解产物的应用

权利要求书

1.一种酶解卵白蛋白的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，(1)将卵白蛋白、木瓜肽酶、L-半胱氨酸、蒸馏水均匀混合，进行酶解反应，木瓜肽酶的氨基酸序列是如SEQ IDNO：1 所示的序列；

(2)对步骤(1)酶解后的混合物加热，过滤去除未酶解的卵白蛋白残渣；

(3)对步骤(2)处理后的酶解产物进行灭菌即可；

步骤(1)提取木瓜肽酶的方法为：

①将木瓜粉溶解于 0. 1M 醋酸-醋酸钠缓冲溶液中；

②向①步混合液中加入硫酸铵，使混合液的饱和度达到 0. 45，放置 12-16h 后抽滤，将上清液体用质量浓度 0. lM NaCl 溶液透析；

③将②步得到的透析液上柱 CM-Sepharose，然后用质量浓度为 0.05 -1.0M NaCl 溶液进行梯度洗脱，收集最后流出的液体；

④向③步得到的液体加入硫酸铵直至溶液饱和度达到 0. 85，放置 12-16h 后抽滤，将得到的沉淀用质量浓度 0. 05M NaCl 溶液透析；将透析液冷冻干燥即可得到木瓜肽酶粉末；

步骤(1)中卵白蛋白、木瓜肽酶、L-半胱氦酸、蒸馏水的质量比为 100：5-10：1-2.5：2000；

步骤(1)中酶解温度为 45-65℃，酶解 pH 为 6-7，酶解时间为 12-24h；

步骤(2)去除未酶解的卵白蛋白残渣的具体方法为，酶解后将温度加热至 90-100℃变性 5-10 分钟，将酶解产物过滤，得到上清液；

步骤(3)灭菌的具体方法为，向经步骤(2)处理后的酶解产物中加入质量浓度为 0.02-0.05%的抗氧化剂，搅拌均匀后，在温度为 121-125℃条件下进行湿热灭菌，所采用的抗氧化剂为维生素 C 与焦亚硫酸钠按照质量配比 10：0. 5-1 的混合物。

2.权利要求 1 所述方法得到的酶解产物的应用，其特征在于，将该酶解产物作为制备治疗肝硬化、肝炎、糖尿病药物的应用。