[发明专利]一种利用乳酸菌静息细胞发酵生产γ-氨基丁酸工艺

摘要

本发明公开了乳酸菌静息细胞发酵生产γ-氨基丁酸（GABA）工艺，利用经过诱导的乳酸菌活性静息细胞体，分散于含有底物的转化缓冲液中，在合适的条件下转化生产γ-氨基丁酸。利用该方法可以大幅度缩短转化时间，提高转化效率，产物成份简单，利于分离提纯。且转化无需无菌条件，设备要求简单，耗能低。经条件优化，本工艺已适合工业化生产。附图说明：附图2为pH对乳酸菌株的生长与发酵生产GABA的影响(▼生长影响；▲发酵影响)。

主权项

一种利用乳酸菌静息细胞发酵生产γ‑氨基丁酸工艺，其特征包括以下步骤：(1)静息细胞获取：将具有γ‑氨基丁酸转化能力的乳酸菌株从斜面培养基上接种于含有诱导剂‑谷氨酸钠（MSG）的改良MRS培养基, 30‑40℃培养20‑40h，12000rmp，4^oC低温离心收集菌体，用柠檬酸缓冲液冲洗3遍后备用;所说的斜面培养基为：蛋白胨(5‑10g/L)、牛肉膏(5‑10g/L)、酵母粉(10‑20 g/L)、葡萄糖(10‑20 g/L)、乙酸钠(2.5‑5 g/L)、磷酸氢二钾(0.5‑2 g/L)、柠檬酸二胺(0.5‑1 g/L)、吐温0.1 g/L、硫酸镁0.2 g/L、硫酸锰0.05 g/L、琼脂粉18g/L,pH为6.0‑8.0;所说的改良MRS培养基为：蛋白胨(5‑10g/L)、牛肉膏(5‑10g/L)、酵母粉(10‑20 g/L)、葡萄糖(10‑20 g/L)、乙酸钠(2.5‑5 g/L)、磷酸氢二钾(0.5‑2 g/L)、柠檬酸二胺(0.5‑1g/L)、吐温0.1 g/L、硫酸镁0.2 g/L、硫酸锰0.05 g/L,pH为6.0‑8.0;所说的柠檬酸缓冲液为：0.2M柠檬酸缓冲液;(2)将活性乳酸菌静息细胞分散于转化缓冲液中，于30‑40℃，100rmp孵育3‑5h，完成转化,静息细胞在缓冲液中的浓度为OD₆₀₀值为1.0‑8.0;所说的转化缓冲液为0.2‑0.4M的柠檬酸缓冲液，并含有60‑200mM的转化底物MSG，乙醇0.5%‑2%（v/v）,pH为3.0‑6.0。