[发明专利]用于核酸检测的PCR和环介导的等温扩增的组合技术

摘要

本发明涉及用于检测样品中是否存在一种或多种靶核酸序列的方法和试剂盒，所述方法包括一系列的利用聚合酶链式反应预扩增所述样品的步骤，然后是一系列的包括对预扩增样品进行等温扩增的步骤，其中所述等温扩增包括包含一对正向引物和反向引物的引物对，所述正向引物具有与需要检测其存在与否的靶序列的第一部分基本上互补的3’部分和与所述靶序列的第二部分基本上同源的5’部分，所述反向引物包含与所述靶序列的第四部分基本上同源的3’部分和与所述靶序列的第三部分基本上互补的5’部分。

主权项

1.用于检测样品中是否存在两种以上靶核酸序列的非诊断方法，所述方法包括以下步骤：a.提供样品，c.为两种以上靶核酸序列中的每一种提供核酸引物对，所述核酸引物对包含引物a)和引物b)，所述引物a)具有与需要检测其存在与否的靶序列的一部分或其3’下游序列互补的3’部分；所述引物b)具有与需要检测其存在与否的靶序列的一部分或其5’上游序列同源的3’部分；所述核酸引物对适合用于对包含所述靶核酸序列的核酸序列进行聚合酶链式反应介导的扩增，d.为两种以上靶核酸序列中的每一种提供核酸引物对，所述核酸引物对包含引物c)和引物d)，所述引物c)具有与需要检测其存在与否的靶序列的第一部分互补的3’部分c1和与所述靶序列的第二部分同源的5’部分c2，所述靶核酸序列的所述第二部分位于所述靶序列的第一部分的5’上游；所述引物d)包含与需要检测其存在与否的靶序列的第四部分同源的3’部分d1和与所述靶序列的第三部分互补的5’部分d2，所述第三部分位于所述第二部分的5’上游，并且第四部分位于所述靶核酸序列的第三部分的5’上游，所述核酸引物组c)和d)适用于扩增所述靶核酸序列的环介导扩增反应，f.使步骤a的样品在步骤c提供的核酸引物对的存在下进行至少一个循环的聚合酶链式反应扩增，由此提供预扩增样品，其中所述样品中的所述两种以上靶核酸序列的量增加，所述预扩增样品分为两个以上子样品，g.使用步骤d中提供的核酸引物对，使步骤f的两个以上预扩增子样品或其子样品进行环介导扩增反应，由此提供样品反应产物，h.使用常规技术在步骤g的样品反应产物中检测是否存在核酸扩增产物。