[发明专利]雷公藤甲素及其衍生物组合物的制备方法

摘要

本发明提供了一种雷公藤甲素及其衍生物组合物的制备方法，通过诱导子作用于雷公藤悬浮细胞液后，得到高产量的雷公藤甲素及其衍生物；该方法所得到的提取物具有抑制肿瘤，乙肝和艾滋病病毒的良好作用，该提取物可以单独或与其它药物配伍或加入药学上可以接受的辅料，制备成软胶囊、或硬胶囊、或滴丸、或片剂、或分散片、或颗粒剂、或注射液、或口服液、或栓剂经口服或皮肤或粘膜或直肠方式应用。

主权项

一种雷公藤甲素及其衍生物组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：以野生两年雷公藤幼苗经室温二次栽培以后的新生根系为外植体，在MS培养基上培养愈伤组织，培养条件为：光照强度为1500lx‑2500lx，温度25±1℃，18‑25天形成愈伤组织；步骤二：将成熟质地疏松的愈伤组织投入6，7‑V培养基中，接种量为5g，置于转速为120r/min摇床上，振荡培养18天，18天继代一次，连续继代5‑8代，即得雷公藤悬浮细胞液；步骤三：调节所述雷公藤悬浮细胞液的pH至5.0，按照每200ml，10g的接种量，加入诱导子，在25℃、振荡速度为120r/min的摇瓶振荡培养18天；此后每隔3天检测反应体系的pH值使pH保持在5.0，当反应体系中的雷公藤甲素及其衍生物的总含量低于0.0001mg/L后，停止震荡培养，过滤除菌后取上清液，将上清液于8000r/min，离心10min去除沉淀；步骤四：将经过步骤三处理所得的上清液与等体积石油醚充分混合，于分液漏斗中静置至分层，弃去石油醚层，再用相对于所述上清液1/2体积的乙酸乙酯萃取3次，过中性氧化铝层析柱脱去色素，再用体积比为4∶1的石油醚‑乙酸乙酯20ml淋洗，然后用体积比为4∶1的石油醚‑乙酸乙酯60ml冲洗柱子，收集洗脱液；用旋转蒸发仪将洗脱液蒸干，加3ml色谱纯甲醇溶解，过0.22μm微孔滤膜，即得产品。