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[发明专利]一种基于环丙烯-四嗪连接反应修饰RNA的方法及其在调控基因编辑和表达中的应用-CN202310196145.2在审
发明人：李盈盈;田沺;齐倩倩;王少儒;袁子恒;张思皓;劳云浩;田搏宇;郭绍元 -专利权人：武汉大学
申请日： 2023-03-03 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C07H21/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于环丙烯‑四嗪连接反应修饰RNA的方法及其在调控基因编辑和表达中的应用。本发明利用生物正交反应，通过在RNA结构中的2’‑OH进行环丙烯(CP)和四嗪类(TZ)化合物的修饰，形成TZ‑CP‑RNA结构，达到抑制其功能的目的。本发明方法的主要步骤为：首先将CPI与RNA的2’‑OH位点进行修饰，随后将TZ衍生物与CP‑RNA进行逆电子需求的Diels‑Alder环加成反应。本发明通过对RNA的特定位点进行小分子修饰，在基因编辑和表达中实现了RNA的抑制调节。本发明的方法具有高可行性、高效率、高选择性以及非细胞毒性等优点，可作为在基因编辑和表达中实现RNA的抑制调节的统一标准。
一种基于丙烯连接反应修饰 rna 方法及其调控基因编辑表达中的应用

[发明专利]一种利用dUTP或dTTP检测核酸中腺嘌呤N6或N1位发生甲基化修饰的方法-CN201910325530.6有效
发明人：赵轩;田沺;王少儒;宋燕燕;王天洋;蒋尚文;万泽中;李惠;范若晨;张楠 -专利权人：武汉大学
申请日： 2019-04-22 - 公布日： 2021-08-17 - 主分类号： C12Q1/6809 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用dUTP或dTTP检测核酸中腺嘌呤N6或N1位发生甲基化修饰的方法。该检测方法主要由两部分组成：第一部分是通过延伸反应将三磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸（dUTP）或三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）掺入DNA序列。第二部分是通过变性聚丙烯酰胺凝胶分析得到含有不同位点的链的延伸百分比，处理后可判断含有不同位点的链的延伸速率从而达到识别检测N6‑甲基腺嘌呤和N1‑甲基腺嘌呤的目的。该方法克服了现有检测方法设备需求高、原料昂贵、操作繁琐等不足，灵敏度高、适应范围广。
一种利用 dutp dttp 检测核酸嘌呤 n6 n1 发生甲基化修饰方法

[发明专利]一种基于大数据的机场电动摆渡车驾驶行为分析方法-CN202011493711.9有效
发明人：张楠楠;王少儒;王斌;常国洁;原金鹏 -专利权人：威海广泰空港设备股份有限公司
申请日： 2020-12-17 - 公布日： 2021-07-13 - 主分类号： B60W40/105 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于大数据的机场电动摆渡车驾驶行为分析方法，其解决了如何提升电动摆渡车运行效率以及保证乘客安全的技术问题，其通过人脸识别设备识别驾驶员身份，识别驾驶员的驾驶行为，结合车辆车速、车辆GPS位置、油门刹车状态等的上传，通过车联网系统进行记录和存储数据。驾驶行为的分析主要依附于加装的各种传感器，通过传感器采集的各种信息综合判断车辆状态。主要包括感知车辆加速还是减速、上坡还是下坡、车辆行的驶里程、速度、路面等指标，也包括不同的驾驶员身份，驾驶过程中驾驶员的行为等，通过实验数据统计计算其权值，对机场电动摆渡车在场内的运行数据进行加权平均修正，得到经过驾驶员行为习惯、趋势以及某些固定路段出现的相似的驾驶行为。本发明可广泛应用于机场电动摆渡车。
一种基于数据机场电动摆渡车驾行为分析方法

[发明专利]一种定型式防护栏杆喷淋一体化装置-CN202010750722.4在审
发明人：牛东伟;李树民;孔德昌;庞虎;张飞;李鸿亮;李策;周刚;吴月红;孙杰;周晓红;李伟;刘新达;马丹;王少儒 -专利权人：天保建设集团有限公司
申请日： 2020-07-30 - 公布日： 2020-11-03 - 主分类号： E04H17/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种定型式防护栏杆喷淋一体化装置，包括防护栏杆和喷淋主管，所述喷淋主管通过调节件连接在所述防护栏杆上方，所述防护栏杆包括设置于上下侧横梁之间的立柱和设置于所述立柱之间的围栏支架，相邻的所述防护栏杆上方的喷淋主管之间连通，所述喷淋主管的一侧设有若干个连通的喷嘴，所述喷淋主管的一端设有位于水池中的水泵；还包括监测机构，所述监测机构、所述水泵均与电源组件电连，所述监测机构与所述水泵之间通讯。本发明采用上述结构的一种定型式防护栏杆喷淋一体化装置，一次安装就确保同时具有防护功能及喷淋降尘两种功能，大大节约了材料及人力。
一种型式防护栏杆喷淋一体化装置

[实用新型]一种电缆热缩管热缩工具-CN201922359484.X有效
发明人：刘月东;张飞;王新培;刘月杰;刘炳强;刘楼;王跃伦;齐福才;安帅;王冲;王少儒;张宇雷;李颖;马博文;宋晓东 -专利权人：天保建设集团有限公司
申请日： 2019-12-25 - 公布日： 2020-08-25 - 主分类号： H01B13/012 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种电缆热缩管热缩工具，包括：加热机构和与加热机构连通的环形通风管；环形通风管的管道以圆形环绕的方式布置；环形通风管的内侧以环形阵列的方式布置有出风孔；环形通风管内侧套接有待加热电缆，本实用新型采用上述结构的一种电缆热缩管热缩工具，可以使热缩管均匀收缩加热，避免了使用喷灯加热发生高温烫伤、烧伤等事故的风险。
一种电缆热缩管热缩工具

[发明专利]一种利用核酸外切酶反应产生引物结合树枝状滚环扩增可视化检测miRNA的方法-CN201710154441.0有效
发明人：周翔;刘奕侬;王少儒;田沺;张小娥;黄俊捷;杨伊文;朱子睿 -专利权人：武汉大学
申请日： 2017-03-15 - 公布日： 2020-03-10 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用核酸外切酶反应产生引物结合树枝状滚环扩增可视化检测miRNA的方法。本发明方法包含三部分，第一部分引物的产生，发卡探针I被靶标miRNA打开后，被核酸外切酶I降解单链部分，而后核糖核酸酶H降解DNA：RNA杂合链中的RNA，留下一段短链DNA；第二部分是树状滚环扩增，上一步产生的单链DNA连接长单链DNA探针成环作为模板，然后以该单链DNA为引物进行一级滚环扩增，在滚环扩增体系中引入的发卡茎环结构II，被一级滚环扩增产物打开，从而多级树枝状滚环扩增；第三部分是根据滚环扩增产物中含有的G‑四链体进行检测。本发明是一种灵敏、经济、方便、原位的可视化检测miRNA的方法。
一种利用核酸外切酶反应产生引物结合树枝状滚环扩增可视化检测 mirna 方法

[发明专利]一种利用二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸检测核酸中腺嘌呤N6位发生甲基化修饰的方法-CN201910325528.9在审
发明人：赵轩;田沺;王少儒;宋燕燕;李惠;蒋尚文;王天洋;万泽中;张楠;范若晨 -专利权人：武汉大学
申请日： 2019-04-22 - 公布日： 2019-08-06 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸检测核酸中腺嘌呤N6位发生甲基化修饰的方法。该检测方法主要由两部分组成。第一部分是对被测核酸或对照核酸通过延伸反应将二磷酸尿嘧啶脱氧核苷酸（dUDP）掺入基因组序列。第二部分是使用变性聚丙烯酰胺凝胶分析延伸反应结果，经数据处理后得到被测核酸或对照核酸的延伸百分比，进行比较从而实现识别检测N⁶‑甲基腺嘌呤和N¹‑甲基腺嘌呤。该方法克服了现有检测方法设备需求高、操作繁琐等不足，灵敏度高、适应范围广，所用原料简单易得，操作简便。
核酸脱氧核苷酸磷酸尿检测嘧啶甲基化修饰甲基腺嘌呤延伸反应腺嘌呤变性聚丙烯酰胺凝胶基因组序列设备需求数据处理灵敏度掺入延伸分析

[发明专利]一种识别检测DNA中5-羟甲基胞嘧啶和5-甲酰胞嘧啶的方法-CN201910179984.7在审
发明人：赵轩;王少儒;刘奕侬;万泽中;王天洋;李惠;蒋尚文;范若晨;张楠 -专利权人：武汉大学
申请日： 2019-03-11 - 公布日： 2019-06-21 - 主分类号： C12Q1/6809 文献下载
摘要：本发明公开了一种识别检测DNA中5‑羟甲基胞嘧啶和5‑甲酰胞嘧啶的方法，属于分子生物学、核酸化学和表观遗传学领域。本发明方法包括如下步骤：将待检DNA加到含高钌酸钾和碱的混合溶液中，冰水浴条件下反应使DNA中的5hmC氧化为5fC；反应后的NDA纯化后加入到热碱溶液中保温反应使DNA裂解，凝胶分析测得DNA中5hmC和5fC的总数目和位点；待检DNA不经高钌酸钾氧化直接加入到热碱溶液中保温反应使DNA裂解，凝胶分析测得DNA中5fC的数目和位点；对比两次结果得到DNA中5hmC和5fC各自的数目和位点。本发明方法克服了现有检测方法设备需求高、操作繁琐等不足，灵敏度高、适应范围广。
位点保温反应凝胶分析热碱溶液胞嘧啶钌酸钾裂解检测表观遗传学分子生物学混合溶液中核酸化学设备需求灵敏度冰水浴羟甲基甲酰

[发明专利]一种利用两步扩增法检测MicroRNA的方法-CN201610019896.7有效
发明人：周翔;陈玉琪;宋燕燕;王少儒 -专利权人：武汉顺可达生物科技有限公司;武汉大学
申请日： 2016-01-13 - 公布日： 2019-01-29 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用滚环扩增‑环介导等温扩增两步扩增法检测MicroRNA的方法。首先设计一个以目标microRNA为环化连接探针的线性滚环扩增模板，并以该线性滚环扩增模板为引物进行滚环扩增，实现信号的第一步放大；然后将滚环扩增产物用限制性内切酶切割成相同的短单链，以这些短单链为模板进行环介导扩增，实现信号的第二步放大。环介导等温扩增的扩增过程由实时荧光定量PCR监测，扩增的样品中加入DNA显色剂，当扩增的DNA产物增多时，DNA显色剂的荧光增强，其荧光信号被实时荧光定量PCR采集和输出。本发明采用两步扩增法放大microRNA的信号，是一种低背景高灵敏度的检microRNA的方法。
一种利用扩增检测 microrna 方法

[发明专利]一种基于滚环扩增和上转换材料检测microRNA的方法-CN201610040179.2有效
发明人：周翔;肖珩;王少儒;杨雨青;李娓 -专利权人：武汉顺可达生物科技有限公司;武汉大学
申请日： 2016-01-21 - 公布日： 2019-01-29 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明涉及一种检测microRNA的方法和试剂盒：向含microRNA的体系中加入microRNA检测探针，探针末端区域与靶标microRNA以碱基配对的方式结合，再加入T4 DNA连接酶，使探针的3’端和5’端连接起来，形成环状结构；然后加入5’端修饰有生物素的DNA引物，并加入Phi 29 DNA聚合酶，进行滚环扩增；扩增结束后，将链霉亲和素磁珠加入到待测体系中，利用铁磁体钓取后洗脱；随后，将修饰有DNA的上转换材料加入到待测体系中，上转换材料上的单链DNA与磁珠上钓取出的引物DNA以碱基配对结合，孵育后，利用铁磁体将磁珠吸附，洗脱掉未配对结合的上转换材料，留下的磁珠吸附的上转换材料部分作为信号输出；最后，在荧光分光光度计上，使用980nm的激发光激发，得到上转换材料的荧光信号来检测microRNA含量。
一种基于扩增转换材料检测 microrna 方法

[发明专利]一种连接反应引发的超分支滚环扩增检测miRNA的方法-CN201710162311.1在审
发明人：周翔;刘奕侬;王少儒;田沺;张小娥;黄俊捷;杨伊文 -专利权人：武汉大学
申请日： 2017-03-17 - 公布日： 2017-06-13 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种连接反应引发的超分支滚环扩增检测miRNA的方法，属于分子生物学和核酸化学领域。本发明方法主要由三部分组成；第一部分是5'端磷酸化的锁式探针的两末端与靶标miRNA互补配对后利用SplintR连接酶连接成环；第二部分是超分支滚环扩增，锁式探针成环后作为模板、靶标miRNA作为引物，在phi29 DNA聚合酶的作用下发生线性滚环扩增，通过引入二级引物，使线性滚环扩增沿着支链方向发展，达到信号进一步放大；第三部分是往滚环扩增产物中加入SYBR GREEN I染料进行检测。本发明操作简单、成本较低、体系单一、灵敏度高、无背景荧光信号干扰，适于复杂生物环境中miRNA的检测。
一种连接反应引发分支扩增检测 mirna 方法

[发明专利]一种基于核酸外切酶的microRNA多色检测探针及检测方法-CN201510530744.9在审
发明人：周翔;王少儒;张小娥 -专利权人：武汉顺可达生物科技有限公司;武汉大学
申请日： 2015-08-26 - 公布日： 2015-12-02 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于核酸外切酶的microRNA多色检测探针及检测方法。本发明检测探针为发卡结构的DNA，包含三个部分：茎末端区、loop环状区和5'、3'末端标记的荧光基团、淬灭基团；环状区包含待测miRNA的互补序列。没靶标miRNA时发卡结构稳定，荧光基团和淬灭基团彼此靠近，荧光被淬灭；靶标miRNA存在时，环结构与靶标结合后发卡结构打开形成DNA-RNA杂合体，5'与3'端部分裸露出来，露出来的单链DNA的3'端能被核酸外切酶识别降解，淬灭基团从杂合体中脱落从而使荧光恢复。根据检测标靶的不同设计相对应的探针，并且标记不同的荧光基团淬灭基团对，能实现多种miRNAs的同时检测。
一种基于核酸外切酶 microrna 多色检测探针方法

[发明专利]一种定位定量检测DNA和RNA中6-甲基氨基嘌呤的方法-CN201410316151.8有效
发明人：周翔;王少儒;田沺;王佳琪;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2014-07-04 - 公布日： 2014-09-10 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种定位定量检测DNA和RNA中6-甲基氨基嘌呤的方法。通过对DNA和RNA中6-甲基氨基嘌呤的检测来反映核酸的甲基化水平：6-甲基氨基嘌呤的存在会降低DNA复制和RNA逆转录时的底物活性，在DNA复制和RNA转录过程中，有甲基化位点出现时，将不会发生链延伸；因此，可以通过掺入脱氧核苷三磷酸进行链延伸来达到区分甲基化和非甲基化序列的目的，同时可以对DNA和RNA的特定位点的甲基化水平做出定量评估。本发明可很好地用在DNA和RNA的核苷酸分离中的6-甲基氨基嘌呤分析上，是一种简便的检测DNA和RNA中腺嘌呤甲基化程度的方法。
一种定位定量检测 dna rna 甲基氨基嘌呤方法

[发明专利]一种microRNA检测探针和检测microRNA的方法-CN201310126387.0无效
发明人：周翔;彭双;王少儒;田沺;翁小成 -专利权人：武汉大学
申请日： 2013-04-12 - 公布日： 2013-06-19 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种microRNA检测探针和检测microRNA的方法。检测探针，由三部分组成，中间区域为与靶标microRNA互补的单链DNA，所述单链DNA的一端连着DNA酶，作为信号输出部分，所述单链DNA另一端为标记上的生物素。待测体系中加入探针，探针的单链DNA与标靶microRNA互补配对，DSN选择性的消化DNA-RNA杂交的DNA链，RNA循环使用。加入链霉亲和素磁珠，通过铁磁体将磁珠连同未反应生物素标记的探针从水溶液中去除。溶液部分仍然用于进一步的信号输出反应。本发明的检查方法采用DSN放大加上核酶放大，是一个低背景高灵敏度特异性强的检测microRNA方法。
一种 microrna 检测探针方法

[发明专利]一种microRNAs荧光检测探针-CN201210411766.X无效
发明人：周翔;王少儒;田沺;翁小成;肖珩 -专利权人：武汉大学
申请日： 2012-10-24 - 公布日： 2013-01-30 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种microRNA荧光检测探针，该探针为折叠结构，包括：末端区，该区域为双链结构；环状区，为单链结构，包括待测靶标的互补序列以及间隔序列，间隔序列不与探针的其它序列形成二级结构。该探针末端区能保持探针折叠型结构的相对稳定，在加入含有检测对象的样品时，折叠型结构打开，加入与检测探针的末端区互补的引物，并加入不具外切酶活性的DNA聚合酶，通过引物延伸以及相应的链置换释放出microRNA，并使探针恢复产生荧光信号，通过产生的检测荧光信号来检测相应的靶microRNA。通过设计针对不同RNA的探针且标记不同的荧光，则可以实现不同microRNA的同时检测。
一种 micrornas 荧光检测探针

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