[发明专利]一种抗氧化肽及其制备方法

摘要

本发明涉及一种抗氧化肽及其制备方法。本发明利用花生粕及自制的成曲酶，通过酶法水解，得到花生粕酶解液，再利用超滤膜、凝胶过滤色谱及反相高效液相色谱对其进行分离纯化得到一种新的抗氧化肽产品，并测定其氨基酸序列。该产品的氨基酸序列为Tyr-Gly-Ser，分子量为325.3Da，具有很强的抗氧化作用，氧自由基吸收能力是还原型谷胱甘肽的4倍，而且该肽具有分子量小、可被人体直接吸收的特点，因此可以广泛应用于食品、保健品及化妆品等领域。

主权项

一种抗氧化肽的制备方法，其特征在于该方法步骤如下：（1）成曲酶的制备：将10～30g麸皮，5～20g花生粕，0.01～0.1g氯化钙和15～50g去离子水混合均匀；在高压蒸汽灭菌锅中100～121℃下杀菌15～30min，冷却至38℃，接种米曲霉,在培养箱28～32℃培养48～72h；加入200mL去离子水，在30‑50℃水浴中搅拌1‑3h，在0‑4℃下5000～10,000 × g离心20～30min，取上清液，冷冻干燥得成曲酶；（2）花生粕酶解物的制备：将花生粕与水按质量比1：4～1：8混合，加入占花生粕蛋白质量0.4%～1%的成曲酶，在50～55℃酶解4～24h；85～95℃下灭酶15～30min，离心，取上清液，得到花生粕酶解液；（3）抗氧化肽的分离纯化：将花生粕酶解液通过截留分子量为3000Da的超滤膜，滤去大分子，取透过液，冷冻干燥成粉末；再用Sephadex G‑15凝胶柱进行分离纯化，用去离子水以0.6～2 ml/min的流速进行洗脱，检测波长为214nm，测定各洗脱峰对应组分的抗氧化活性，收集活性最高的组分，然后冷冻干燥得粉末A；（4）将粉末A溶于水后用反相高效液相色谱进一步纯化，色谱柱为XBridge pre C18 柱，流动相为A相和B相，洗脱程序为：0‑4min内采用的流动相中A与B体积比为5:95‑10:90, 4‑8min内采用的流动相中A与B体积比为10:90‑30:70，8‑12min内采用的流动相中A与B体积比为30:70‑50:50，12‑30min内采用的流动相中A与B体积比为50:50，流速为2ml/min，检测波长为214nm，测定各洗脱峰对应组分的抗氧化活性，收集活性最高的组分。