[发明专利]一种抗氧化肽及其制备方法

权利要求书

1.一种抗氧化肽的制备方法，其特征在于该方法步骤如下：

（1）成曲酶的制备：将10～30g麸皮，5～20g花生粕，0.01～0.1g氯化钙和15～50g去离子水混合均匀；在高压蒸汽灭菌锅中100～121℃下杀菌15～30min，冷却至38℃，接种米曲霉,在培养箱28～32℃培养48～72h；加入200mL去离子水，在30-50℃水浴中搅拌1-3h，在0-4℃下5000～10,000 × g离心20～30min，取上清液，冷冻干燥得成曲酶；

（2）花生粕酶解物的制备：将花生粕与水按质量比1：4～1：8混合，加入占花生粕蛋白质量0.4%～1%的成曲酶，在50～55℃酶解4～24h；85～95℃下灭酶15～30min，离心，取上清液，得到花生粕酶解液；

（3）抗氧化肽的分离纯化：将花生粕酶解液通过截留分子量为3000Da的超滤膜，滤去大分子，取透过液，冷冻干燥成粉末；再用Sephadex G-15凝胶柱进行分离纯化，用去离子水以0.6～2 ml/min的流速进行洗脱，检测波长为214nm，测定各洗脱峰对应组分的抗氧化活性，收集活性最高的组分，然后冷冻干燥得粉末A；

（4）将粉末A溶于水后用反相高效液相色谱进一步纯化，色谱柱为XBridge pre C18 柱，流动相为A相和B相，洗脱程序为：0-4min内采用的流动相中A与B体积比为5:95-10:90, 4-8min内采用的流动相中A与B体积比为10:90-30:70，8-12min内采用的流动相中A与B体积比为30:70-50:50，12-30min内采用的流动相中A与B体积比为50:50，流速为2ml/min，检测波长为214nm，测定各洗脱峰对应组分的抗氧化活性，收集活性最高的组分。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述A相为甲醇，B相为质量浓度0.1%的三氟乙酸水溶液。

3.由权利要求1所述制备方法制得的抗氧化肽，其特征在于，具有Tyr-Gly-Ser的氨基酸序列。