[发明专利]利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法无效
| 申请号： | 201110185827.0 | 申请日： | 2011-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN102286581A | 公开（公告）日： | 2011-12-21 |
| 发明（设计）人： | 孙爱友;魏东芝;王学东;徐瑞;董玉国;倪克奉;王丽华 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12P21/02 | 分类号： | C12P21/02;C07K1/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 林君如 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法，将单个新鲜的大肠杆菌工程菌单克隆接种培养基后加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导，然后离心收集细胞，加入裂解液，超声破碎，收集上清液，利用Proinity eXect纯化柱对目的蛋白进行纯化，即获得肿瘤转移抑制蛋白GDI2。与现有技术相比，本发明具有可溶性表达水平高、纯化工艺简单、产品纯度高、易扩大生产和成本低的特点，具有较大的工业化应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 大肠杆菌 生产 肿瘤 转移 抑制 蛋白 gdi2 纯化 方法 | ||
【主权项】：
利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将单个新鲜的大肠杆菌工程菌单克隆接种于含有氨苄青霉素的LB培养基中，在37℃、200rpm/min的条件下振荡培养过夜，然后再将其接种于优化过的LB培养基中在相同条件下继续培养，当OD600＝0.6‑0.8时，加入异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导，在37℃、200rpm/min的条件下继续培养6h；(2)离心收集细胞，加入裂解液，超声破碎，收集上清液，利用Proinity eXect纯化柱对目的蛋白进行纯化，使用Band Buffer冲洗Proinity eXect纯化柱，再将上清液按2ml/min的速度上柱，接着使用Wash Buffer冲洗柱上杂蛋白，加入EloutionBuffrt孵育1h，最后收集穿透液，即获得纯化的肿瘤转移抑制蛋白GDI2。
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