[发明专利]利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法无效

申请号：	201110185827.0	申请日：	2011-07-04
公开（公告）号：	CN102286581A	公开（公告）日：	2011-12-21
发明（设计）人：	孙爱友;魏东芝;王学东;徐瑞;董玉国;倪克奉;王丽华	申请（专利权）人：	华东理工大学
主分类号：	C12P21/02	分类号：	C12P21/02;C07K1/22;C12R1/19
代理公司：	上海科盛知识产权代理有限公司 31225	代理人：	林君如
地址：	200237 ***	国省代码：	上海;31
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摘要：
搜索关键词：	利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白 gdi2 纯化方法
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【权利要求书】：

1.利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)将单个新鲜的大肠杆菌工程菌单克隆接种于含有氨苄青霉素的LB培养基中，在37℃、200rpm/min的条件下振荡培养过夜，然后再将其接种于优化过的LB培养基中在相同条件下继续培养，当OD₆₀₀＝0.6-0.8时，加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导，在37℃、200rpm/min的条件下继续培养6h；

(2)离心收集细胞，加入裂解液，超声破碎，收集上清液，利用Proinity eXect纯化柱对目的蛋白进行纯化，使用Band Buffer冲洗Proinity eXect纯化柱，再将上清液按2ml/min的速度上柱，接着使用Wash Buffer冲洗柱上杂蛋白，加入EloutionBuffrt孵育1h，最后收集穿透液，即获得纯化的肿瘤转移抑制蛋白GDI2。

2.根据权利要求1所述的利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法，其特征在于，所述的LB培养基的组成包括以下组分及含量：蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、NaCl 10g/L，利用3mol/L盐酸溶液和3mol/L NaOH溶液将培养基的pH值调整至7.0，氨苄青霉素的含量为50μg/ml。

3.根据权利要求1所述的利用大肠杆菌生产肿瘤转移抑制蛋白GDI2的纯化方法，其特征在于，所述的优化过的LB培养基的组成包括以下组分及含量：蛋白胨10-15g/L、酵母粉5-10g/L、葡萄糖(C₆H₁₂O₆·H₂O)2-5g/L、NaCl 1-2g/L、NaH₂PO₄·12H₂O 2-4g/L、Na₂HPO₄·3H₂O7-9g/L、K₂HPO₄·3H₂O 4-6g/L、ZnSO₄·7H₂O0.1-0.2g/L、MgSO₄·7H₂O 1-2g/L，溶剂为蒸馏水，利用3mol/L盐酸溶液和3mol/LNaOH溶液将培养基的pH值调整至7.0。