[发明专利]一种羧肽酶B的制备方法及其组合物

摘要

本发明一种羧肽酶B的制备方法及其组合物涉及酶学、含有酶的组合物及分离或纯化方法技术领域。本发明所要解决的技术问题是提供一种羧肽酶B的制备方法及其组合物以解决现有技术中羧肽酶B制备方法得率低及羧肽酶B不稳定的缺陷。公开了一种制备羧肽酶B的方法，包括盐析、疏水层析和阴离子交换层析的步骤，其特征在于用1～5倍量丙酮处理2～3次，制成丙酮粉；并公开了一种含有3-5重量份的甘露醇的羧肽酶B组合物。该发明羧肽酶B的得率达60U/g胰脏以上，收率提高了20％以上，羧肽酶B的比活性大于200U/mg，羧肽酶B稳定性2年。

主权项

一种羧肽酶B的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将猪冻胰脏机械粉碎后自溶16～24hr，加3倍量预冷丙酮处理2次，收集滤渣，然后用2～5倍量体积比1∶1的丙酮乙醚混合液处理，收集滤渣，干燥后获得丙酮粉；(2)丙酮粉加水搅拌，调节pH至7.0～8.0，抽提1～4hr，过滤或离心，收集清液；(3)清液按1.5mol/L加入硫酸铵，放置1.5hr，过滤，收集滤液即为盐析液；(4)盐析液上用平衡缓冲液预先平衡的疏水层析柱，上样完毕，用平衡缓冲液平衡至A280nm吸光度值到基线后用洗脱缓冲液洗脱，检测A280nm吸光度值，收集第一洗脱峰即得含羧肽酶B的疏水层析液，疏水层析的条件为：疏水层析介质是Octyl Sepharose 4 Fast Flow，平衡缓冲液是20mmol/LTris HCl、pH7.5～8.0、含1.5mol/L硫酸铵，洗脱缓冲液是20mmol/LTris HCl、pH8.0，流速12cm/hr～16cm/hr；和，(5)含羧肽酶B的疏水层析液上预先用20mmol/L Tris HCl、pH8.0平衡的DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱，上样完毕，用20mmol/LTris HCl、pH7.5～8.0平衡至A280nm吸光度值到基线后，用洗脱缓冲液20mmol/L Tris HCl、pH7.5～8.0、NaCl线性梯度0 0.1M/5倍柱体积洗脱，流速为18cm/hr～24cm/hr，检测A280nm吸光度值，收集含有羧肽酶B的洗脱液，即得羧肽酶B。