[发明专利]一种黄瓜枯萎病菌分子检测方法

摘要

一种黄瓜枯萎病菌分子检测方法，它涉及一种黄瓜枯萎病菌检测方法。它解决了现有黄瓜枯萎病菌分子检测中采用PCR-RFLP方法存在真菌通用引物特异性不强及方法繁琐，而采用巢式PCR方法需要2步PCR扩增，易污染的问题。方法：一、引物Fc-1和Fc-2；二、提取染病样品基因组DNA进行PCR扩增；三、将PCR扩增产物进行电泳，然后用凝胶成像系统分析，在315bp处出现特异条带，则染病样品带有黄瓜枯萎病菌，即完成检测。本发明引物Fc-1和Fc-2具有高度特异性，灵敏性高，仅需1步反应在2h内就可获得检测结果，快速、简单，不易污染。

主权项

一种黄瓜枯萎病菌分子检测方法，其特征在于黄瓜枯萎病菌分子检测方法按以下步骤实现：一、根据黄瓜枯萎病菌的核糖体内转录间隔区DNA序列的特性，设计对枯萎病菌具特异扩增作用的一对引物Fc-1和Fc-2；二、提取染病样品基因组DNA，采用引物Fc-1和Fc-2对基因组DNA进行PCR扩增；三、将PCR扩增产物在含GelRed染色剂的1.0％琼脂糖凝胶上用1×TAE缓冲液进行电泳，电泳结束后用凝胶成像系统分析，在315bp处出现特异条带，则染病样品带有黄瓜枯萎病菌，即完成检测；其中步骤一中Fc-1为5`-CATACCACTTGTTGCCTC-3`，Fc-2为5`-ATTAACGCGAGTCCCACC-3`；步骤二中PCR扩增反应体系：25μl反应体系，由10×PCR缓冲液2.5μl，2.5mM dNTP 2μl，10μM引物Fc-11μl、10μM引物Fc-21μl，10ng/μl基因组DNA1μl，Easy Tag DNA Polymerase 1U和余量无菌去离子水组成；步骤二中PCR扩增条件为：94℃预变性5min；然后94℃变性30s，60℃退火1min，72℃延伸1min，共40个循环，最后72℃延伸10min补齐末端，扩增完成；步骤三中电泳的电压为4～5V/cm。