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[发明专利]一种1,4-α-葡聚糖分支酶、编码基因及工程菌株与应用-CN202011620279.5有效
发明人：黄静;杨婷;胡倩瑜;金明飞;万惠惠;施瑞;叶天韵;管媛媛 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2020-12-30 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种1,4‑α‑葡聚糖分支酶(1,4‑α‑glucan branching enzyme；GBE)编码基因及工程菌株与应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明针对具有热稳定性较强的目标GBE，通过基因挖掘得到候选基因；获得的候选基因GBE(SEQ ID NO.1)来源于地衣芽孢杆菌ATCC14580，通过质粒pET32a(+)导入到宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3)中，得到工程菌，并实现GBE的胞内部分可溶性及包涵体表达。该重组酶GBE具优良的热稳定特性、酶学特性，具有分支活性，可用于淀粉改性，适合食品、化妆品和医药等工业应用的需要，具有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值。
一种聚糖分支编码基因工程菌株应用

[发明专利]一种蛋白质谷氨酰胺酶改性酪蛋白及其制备方法和应用-CN202111677153.6在审
发明人：黄静;张政;高红亮;黄灵灵;王冬瑞;金明飞;蒋德明;常忠义 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2021-12-31 - 公布日： 2023-07-11 - 主分类号： A23J3/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种蛋白质谷氨酰胺酶改性酪蛋白及其制备方法和应用。所述方法为：将酪蛋白分散于水制备得到酪蛋白分散液；加入蛋白质谷氨酰胺酶进行脱酰胺反应及终止反应；经冷冻干燥得到脱酰胺改性的改性酪蛋白。本发明改性酪蛋白与未改性酪蛋白相比，其蛋白分子主体结构相似，但改性酪蛋白的谷氨酰胺残基比例与未改性酪蛋白相比显著下降，谷氨酸残基比例增加，水溶性增加，具有更优良的乳化性及乳化稳定性，尤其是作为奶制品的蛋白含量补充剂或乳化稳定剂时，可以有效解决高含量蛋白奶制品中的蛋白沉淀、析出和分层等问题。同时，改性酪蛋白作为食品级的天然乳化剂及乳化稳定剂，安全性高，效果好，是食品生产加工等应用的优选蛋白质。
一种蛋白质谷氨酰胺改性蛋白及其制备方法应用

[发明专利]一种促进产谷氨酰胺转胺酶的茂源链霉菌快速生长的培养基及其配制方法和应用-CN201810502575.1有效
发明人： 金明飞;高红亮;田苏;常忠义;陈璐;张玉如;武世强;陈中山 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2018-05-23 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N1/38 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进产谷氨酰胺转胺酶的茂源链霉菌快速生长的培养基，其组分及质量体积比为：可溶性淀粉16～24g/L、KNO30.8～1.2g/L、MgSO4·7H2O0.4～0.6g/L、K2HPO4·3H2O 0.4～0.6g/L、NaCl 0.4～0.6g/L、FeSO4·7H2O0.008～0.012g/L、碱性氨基酸0.1～2g/L，琼脂20g/L，pH值6～8。本发明采用产谷氨酰胺转胺酶的茂源链霉菌为实验菌株，在上述配制的培养基上，培养四天的菌苔的厚实度与不加碱性氨基酸的对照培养基上培养七天的菌苔厚实度差异不明显。将本发明所述的培养基上生长四天的菌苔进行种子及发酵培养，获得的谷氨酰胺转胺酶产量与培养七天的对照组相比无明显差异。本发明显著降低了产谷氨酰胺转胺酶的茂源链霉菌的生长时间，大大提高了工业生产效率。
一种促进谷氨酰胺转胺酶茂源链霉菌快速生长培养基及其配制方法应用

[发明专利]一种蛋白质谷氨酰胺酶生产菌株、筛选、及特性分析方法-CN202010927185.6有效
发明人：黄静;朱锐;施瑞;杨婷;万惠惠;叶天韵;金明飞;张政 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2020-09-07 - 公布日： 2023-05-09 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株，该菌株命名为解朊金黄杆菌ChryseobacteriumproteolyticumA4142，于2020年7月10日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.20337。该菌株呈杆状，不产芽孢，革兰氏阴性，其菌落为圆形，菌落状态饱满，边缘光滑，无缺刻，菌落有粘性。将所述解朊金黄杆菌A4142菌株在培养基中发酵培养，产酶量高达2.15U/mL。本发明还公开了一种新型的蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的筛选方法，并对其进行特性分析，确定该菌株为解朊金黄杆菌。本发明在蛋白质谷氨酰胺酶的工业化生产方面具有良好的实施前景。
一种蛋白质谷氨酰胺生产菌株筛选特性分析方法

[发明专利]一种发酵法生产硫酸化多糖的菌株及其应用-CN202011579906.5有效
发明人：孙艳芳;王书畅;高红亮;常忠义;蒋德明;金明飞;邹春静;贾彩凤;黄静 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2020-12-28 - 公布日： 2022-12-02 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis GX10‑35，其保藏编号为CGMCC No.21277，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2020年12月2日；所述菌株通过从纳豆食品中筛选、分离、纯化、培养获得，能合成和分泌硫酸化多糖。本发明还公开了上述枯草芽孢杆菌GX10‑35通过发酵生产硫酸化多糖的方法。本发明不受化学法制备的硫酸化多糖易降解的缺点及动物软骨资源匮乏的约束，有利于大量生产；生产工艺简单，条件温和，因而成本较低；此外环境污染小。用本发明的菌株生产的硫酸化多糖可作为医药、营养食品、药用化妆品和功能性食物等的原料。
一种发酵生产硫酸多糖菌株及其应用

[发明专利]一种提高发酵生产谷氨酰胺转胺酶产量的方法-CN201911011008.7有效
发明人：高红亮;金明飞;刘颖;牛延宁;蒋德明;常忠义 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2019-10-23 - 公布日： 2022-10-25 - 主分类号： C12N9/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高发酵生产谷氨酰胺转胺酶产量的方法。该方法采用茂原轮枝链霉菌(Streptoverticillium mobaraense)DSM 40587为实验菌株，斜面孢子经种子培养后，接种至添加大豆多糖的发酵培养基中发酵制备谷氨酰胺转胺酶(MTG)，结果发现谷氨酰胺转胺酶的表达量显著提高。其中，添加6g/L的大豆多糖作用效果最佳。该方法的优点是使用的大豆多糖无毒无害，成本低廉，操作方便，能够提高工业生产谷氨酰胺转胺酶效率并降低经济成本。在相同实验条件下，大豆多糖的添加能使产酶时间提前27.6％及以上，显著缩短发酵时间。
一种提高发酵生产谷氨酰胺转胺酶产量方法

[发明专利]一株解淀粉芽孢杆菌及其应用-CN202110737301.2有效
发明人： 金明飞;叶天韵;黄静;杨婷;马妍;吴雅婷;常忠义 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2021-06-30 - 公布日： 2022-10-25 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一株产胞外蛋白能力和淀粉能力强的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BA‑HS；将此菌株接种至发酵培养基中发酵，即可使发酵上清淀粉酶的表达量高达60U/mL；以此菌株为宿主表达编码1,4‑α‑葡聚糖分支酶的基因构建得到的重组菌接种至发酵培养基中发酵，可得发酵上清中1,4‑α‑葡聚糖分支酶的酶活最高达300U/mL。本发明方法在自然界筛选出解淀粉芽孢杆菌，根据特性分析找到淀粉酶和蛋白酶较高的菌株，针对性地探索野生解淀粉芽孢杆菌的电转条件，并对其进行优化，从而提高转化效率并成功表达异源蛋白。
一株解淀粉芽孢杆菌及其应用

[发明专利]琥珀酰多糖高产菌株及琥珀酰多糖的制备和应用-CN201910536858.2有效
发明人：高红亮;杨丽;金明飞;蒋德明;牛延宁;常忠义 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2019-06-20 - 公布日： 2022-09-20 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一株新的琥珀酰多糖高产菌株AT311‑15及其制备方法和应用，所述琥珀酰多糖高产菌株AT311‑15经NTG化学诱变得到，为根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC No.15169。将该菌株所产胞外多糖结构琥珀酰多糖应用于面条制作中，显著改善面条的蒸煮特性及质构特性。本发明具广泛应用前景。
琥珀多糖高产菌株制备应用

[发明专利]一种快速生产细菌纤维素面膜的方法-CN202110080132.X在审
发明人：蒋德明;黄轶敏;田爱田;高红亮;常忠义;金明飞;邹春静;贾彩凤;黄静 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2021-01-21 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： A61K8/73 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用固态培养基快速发酵生产细菌纤维素面膜的方法，所述方法包括：将能产生细菌纤维素的菌株在种子培养基中活化后，接种到固态发酵培养基中静态发酵培养，形成所述细菌纤维素面膜；其中，所述固态发酵培养基pH值为5.0～7.0。本发明所述方法能快速地生产均一性好、透明度高、贴肤性强的细菌纤维素面膜，且易于实现大规模培养。
一种快速生产细菌纤维素面膜方法

[发明专利]一种利用蛋白质谷氨酰胺酶改性豌豆蛋白的方法-CN202111583581.2在审
发明人：高红亮;黄灵灵;蒋德明;武宇晨;邢玉倩;黄大亭;吴佳婧;邹春静;黄静;金明飞;贾彩凤;常忠义 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2021-12-22 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： A23J1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用蛋白质谷氨酰胺酶改性豌豆蛋白的方法，通过采用蛋白质谷氨酰胺酶对豌豆蛋白进行脱酰胺改性，获得酶改性的豌豆蛋白；具体包括以下步骤：将豌豆蛋白边搅拌边加入磷酸缓冲液中形成一定底物浓度的蛋白质分散溶液；向所述豌豆蛋白分散液中加入食品级蛋白质谷氨酰胺酶进行脱酰胺处理；反应完成后，将所述豌豆蛋白分散液进行水浴使蛋白质谷氨酰胺酶灭活；对所述豌豆蛋白分散液进行真空冷冻干燥得到脱酰胺改性豌豆蛋白。该方法工艺简单，能使豌豆蛋白脱酰胺，从而提高其溶解度、起泡性和乳化稳定性，可大规模工业化生产应用。
一种利用蛋白质谷氨酰胺改性豌豆蛋白方法

[发明专利]一种提高蛋白质谷氨酰胺酶酶活的发酵培养基-CN202111659408.6在审
发明人：高红亮;黄大亭;蒋德明;黄灵灵;牛津津;吴佳婧;邹春静;黄静;金明飞;贾彩凤;常忠义 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2021-12-30 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高蛋白质谷氨酰胺酶酶活的培养基，包括：α‑乳糖1g/L‑10g/L，多聚蛋白胨15g/L‑25g/L，高分子聚合物1‑20g/L，Na2HPO40.17g/L，KH2PO44.89g/L，MgSO4·7H2O 2.5g/L，FeSO4·7H2O 0.05g/L，pH 5.8。本发明还公开了一种提高蛋白质谷氨酰胺酶酶活的方法，将解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)CGMCC No.10532菌株接入发酵培养基中振荡培养12h‑18h，得到所述蛋白质谷氨酰胺酶的发酵液。本发明通过在发酵培养基中，添加高分子聚合物PEG2000，可使蛋白质谷氨酰胺酶酶活提高60％～80％。
一种提高蛋白质谷氨酰胺酶酶活发酵培养基

[发明专利]一种提高可得然胶高产菌株筛选效率的方法-CN201910139421.5有效
发明人：陆泽赟;马红豆;高红亮;江文正;常忠义;金明飞;黄静;步国建 -专利权人：华东师范大学;泰兴市东圣生物科技有限公司
申请日： 2019-02-25 - 公布日： 2022-03-11 - 主分类号： C12N15/01 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高可得然胶高产菌株筛选效率的方法，属于微生物育种技术领域，主要包括以下步骤：(1)产可得然胶出发菌株的培养；(2)出发菌株的NTG诱变；(3)配制苯胺蓝平板筛选培养基；(4)在苯胺蓝筛选培养基中加入NaI和NaIO3；(5)诱变菌液在苯胺蓝和NaI和NaIO3双筛选平板培养基上的初筛；(6)50mL/250mL摇瓶发酵复筛，根据测定粗产量筛选高产菌株；(7)75mL/500mL摇瓶发酵二次复筛，根据测定可得然胶产量筛选高产菌株。本发明方法在平板筛选培养基中添加化学药物NaI和NaIO3，利用其在酸性环境下产生碘单质杀死产酸细菌的原理，增大了筛选得到高产可得然胶菌株的几率，提高了平板筛菌效率，缩短了筛菌周期。
一种提高可得高产菌株筛选效率方法

[发明专利]一种微生物谷氨酰胺转胺酶稳定性的检测方法-CN201710150810.9有效
发明人： 金明飞;王志珍;常忠义;高红亮;陈中山;王玲转;易正芳;步国建 -专利权人：华东师范大学;泰兴市东圣生物科技有限公司
申请日： 2017-03-14 - 公布日： 2022-01-11 - 主分类号： C12Q1/48 文献下载
摘要：本发明公开了一种微生物谷氨酰胺转胺酶MTGase稳定性的检测方法，将MTGase溶液pH调节至5.0‑6.0，然后进行阳离子交换层析；洗脱缓冲液pH为8.0‑9.0，洗脱方法为线性洗脱，经平衡缓冲液和洗脱缓冲液pH梯度洗脱，分离得到MTGase的两个同分异构体(MTGase I1和MTGase I2)，根据MTGase I2/MTGase I1的比值可以测定MTGase的稳定性。本发明还公开了一种MTGase同分异构体的分离方法。本发明方法简单、快捷，灵敏度高，为MTGase的生产品控环节提供更方便、快捷、可靠的检测方法，同时对MTGase后期应用稳定性的控制提供技术保障。
一种微生物谷氨酰胺转胺酶稳定性检测方法

[发明专利]一种提高可得然胶产量的发酵方法-CN201810219817.6有效
发明人：高红亮;陶鹏;陆泽赟;常忠义;金明飞;步国建 -专利权人：华东师范大学;泰兴市东圣生物科技有限公司
申请日： 2018-03-16 - 公布日： 2021-12-07 - 主分类号： C12P19/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高可得然胶产量的发酵新方法，包括以下步骤：将产可得然胶的菌株种子培养液接入发酵培养基中培养，在可得然胶发酵的48小时和72小时，分别放料发酵液，补加新鲜培养基，并且控制发酵过程的溶氧不低于30％。采用本发明工艺比放料补糖工艺可得然胶产量提高了40％，发酵液的凝胶强度提高了58％。当本发明产胶期溶氧控制在30％以上，相对于溶氧在10％以下的工艺，本发明可得然胶产量提高86.7％，凝胶强度提高了91.4％。本发明的方法提高了在发酵中后期生产可得然胶产胶的速率，工艺控制简单，节约生产成本，为微生物发酵生产可得然胶提供了新方法。
一种提高可得产量发酵方法

[发明专利]一种用于水产饲料添加的菌株及其应用-CN202011379988.9在审
发明人： 金明飞;罗钧巾;高雪笛;叶天韵;马妍;吴雅婷;黄静 -专利权人：华东师范大学
申请日： 2020-12-01 - 公布日： 2021-03-12 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于水产饲料添加的菌株及其应用，属于微生物应用技术领域。本发明所述菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BA‑HS，能够分泌具有较高酶活性的蛋白酶及淀粉酶；该菌株已于2020年8月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020389。该菌能够提高鱼类的消化能力，改变鱼类肠道菌群多样性，使得有益菌增加而有害菌减少，提高鱼的免疫能力，从而改善鱼类的生长状况，除此之外对人、动物和植物安全，不存在环境污染问题。本发明中的解淀粉芽孢杆菌培养条件简单，易于工业化生产，可以成为一种理想的鱼饲料添加剂，具有较好的开发应用前景。
一种用于水产饲料添加菌株及其应用

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