本发明涉及转基因玉米VP3C1外源插入片段的旁侧序列及应用。本发明从转Bt vip3Aa‑m3基因的玉米植株中筛选到一个抗草地贪夜蛾虫效果显著的转基因事件VP3C1；通过染色体步移的方法获得了其左边界旁侧序列和右边界旁侧序列，分别如SEQ ID NO.1中第1‑756位所示和如SEQ ID NO.2中第359‑932位所示，VP3C1外源片段是双拷贝单位点反向插入，在玉米基因组上的5’旁侧序列、外源插入序列和3’旁侧序列如SEQ ID NO.3所示。两端的旁侧序列可以作为本转化事件的特异检测序列，通过两个旁侧序列设计引物，可以对转基因事件VP3C1特异性检测，并应用于检测试剂盒的开发。
本发明涉及转基因耐草甘膦玉米GG2外源插入片段的旁侧序列及其应用。发明从转GR79和GAT基因的玉米植株中筛选到一个耐草甘膦效果显著的转基因事件GG2；通过染色体步移的方法获得了其左边界旁侧序列和右边界边界序列，左边界旁侧序列如SEQ ID NO.3的1‑440位所示，右边界旁侧序列如SEQ ID NO.3的6556‑7873位所示。两端的边界序列可以作为本转化事件的特异检测序列，通过两个边界序列设计引物，可以对转基因事件GG2特异性检测，并应用于检测试剂盒的开发。
本发明涉及转基因抗虫玉米2HVB4外源插入片段的旁侧序列及其检测方法。发明从转Bt cry2Ah‑vp基因的玉米植株中筛选到一个抗黏虫效果显著的转基因事件2HVB4；通过染色体步移的方法获得了其3’端边界序列和5’端边界序列，分别如SEQ ID NO.1中第947‑1849位所示和如SEQ ID NO.2中第1‑436位所示。两端的边界序列可以作为本转化事件的特异检测序列，通过两个边界序列设计引物，可以对转基因事件2HVB4特异性检测，并应用于检测试剂盒的开发。
本发明涉及cry2Ah‑vp基因在抗黏虫中的应用。本申请人在Cry2Ah的第354位缬氨酸后面插入一个脯氨酸而从中得到Cry2Ah1‑vp突变体如SEQ ID No.1所示。密码子优化后获得cry2Ah‑vp基因，利用农杆菌介导法将cry2Ah‑vp基因转入玉米，获得了T0代转基因玉米。实验结果表明cry2Ah‑vp基因在转基因玉米不同组织中可以正常转录，六叶期Cry2Ah‑vp蛋白在玉米各个部位的表达量最高，叶片的表达量为2.20μg/g(鲜重)，抽雄期和灌浆期各部位也有较高表达。抗虫实验结果显示转基因玉米对黏虫有很好的杀虫活性，接虫3天后黏虫全部死亡；对玉米螟幼虫有明显的生长抑制作用。
本发明为“人工合成的对鳞翅目害虫高毒力杀虫基因及应用”，属生物防治技术领域。本发明提供的对鳞翅目害虫具有高毒力的mcry2Ah基因、mcry2Ah‑vp基因和mcry2Ah‑sp基因的人工优化、改造并合成的新的DNA序列(见SEQ ID NO2、SEQ ID NO3和SEQ ID NO4)，利用植物偏好的密码子序列，可以提高mcry2Ah基因、mcry2Ah‑vp基因和mcry2Ah‑sp基因在转基因植物中的表达量和稳定表达的特性，mcry2Ah‑sp表现出对抗性鳞翅目害虫的抗虫性高于其他改造基因，可以利用该基因序列转化植物防治害虫和延缓害虫抗性产生。
本发明为“人工合成的对鳞翅目害虫高毒力的mcry1Ba、mcry1Ia基因序列及基因组合”，属生物防治技术领域。本发明提供的两种对鳞翅目害虫具有高毒力的Bt cry1Ba基因和Btcry1Ia基因的人工优化、改造并合成的新的DNA序列(见序列表SEQ ID NO1和SEQ ID NO2)，以利用植物偏好的密码子序列，提高Bt cry1Ba基因和Bt cry1Ia基因在转基因过程中的转化成功率，同时提高在转基因植物中的表达量和稳定表达的特性，通过双基因的组合应用提高基因的杀虫活性。本发明利用组成型表达的启动子构建了新的植物表达载体，转化率高，表达量高且稳定，可用于转基因植物的研究。
本发明涉及转基因抗虫玉米HGK60外源插入片段的旁侧序列及其检测方法，属于生物技术领域。本发明构建了含有Bt cry1Ah基因的植物表达载体pmAhG2，得到了转有Bt cry1Ah基因的转玉米植株，筛选到一个抗玉米螟效果显著的转基因事件HGK60；HGK60玉米事件在其基因组第一号染色体上包含有插入基因序列及在玉米基因组的5’侧翼序列和3’侧翼序列，分别为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。可以根据导入玉米的插入序列和侧翼序列的结合区DNA设计引物，特异性地定性、定量检测HGK60事件。
