本发明公开了一种特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原、多克隆抗体及其制备方法,该特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原包括氨基酸序列如SEQ ID No.1或氨基酸序列如SEQ ID No.2所示,且在特定组氨酸π位的N上甲基化修饰的多肽;通过该特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白免疫原免疫动物可获得特异性识别特定组氨酸甲基化修饰的S100A9蛋白的多克隆抗体,实现快速简易地检测生物样品中S1000A9特定组氨酸甲基化的变化,推动研究特定组氨酸甲基化S100A9蛋白(或钙卫蛋白)的功能影响以及特定生命活动或炎症发生过程中S100A9(或钙卫蛋白)特定组氨酸甲基化动态变化的发展。