本发明涉及高效表达米黑根毛霉脂肪酶的方法。具体而言，本发明提供一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：(1)SEQ ID NO:1第229～1035位核苷酸序列所示的序列；和(2)(1)所述序列的互补序列。本发明还提供一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：(1)编码下式所示的多肽序列的多核苷酸序列：A‑L1‑B‑L2‑RML；式中，A可存在或不存在，当存在时，为米黑根毛霉脂肪酶前导肽；L1在A存在时存在，为蛋白酶kex2和ste13的酶切位点；B为米黑根毛霉脂肪酶前导肽；L2为蛋白酶kex2和ste13的酶切位点；RML表示米黑根毛霉脂肪酶的成熟肽序列；和(2)(1)所述序列的互补序列。
本发明提供了一种具有溶血磷脂酶和/或磷脂酶活力的蛋白。所述蛋白的氨基酸序列与SEQ ID NO：12所示序列相比存在以下突变中的至少1个：L86I，G187D，E209K和A245D。本发明的蛋白不仅可以作为磷脂酶和/或溶血磷脂酶，而且，还可以用于同时需要磷脂酶和溶血磷脂酶的应用，例如，可以应用于L‑α‑甘油磷酸胆碱的制备。
本发明提供了一种甘油单‑二酰酯脂肪酶突变体及其应用。该脂肪酶突变体为在SEQ ID NO:2限定的氨基酸序列进行定点组合突变得到，突变位点包括：E257P，I260L，V264G，Q265L，A268T，G269C，K270L，并使氨基酸的编码提前终止于第271位的氨基酸。与野生型序列相比，本发明的脂肪酶突变体不仅在相同目标基因拷贝数条件下蛋白产量明显提高，而且酶的热稳定性也得到显著提升。
本发明涉及脂肪酶及其应用。具体而言，本发明提供一种多肽，所述多肽选自：(1)在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列第150、222、285和291位中的至少一个位置上具有取代突变的多肽；和(2)由(1)所示的多肽与促进(1)所示多肽表达与纯化的多肽组成的多肽。本发明还提供编码多肽的多核苷酸序列，含多核苷酸序列的核酸构建物，宿主细胞，以及相关的用途。本发明的多肽为脂肪酶，可用于油脂精炼、油脂加工、油脂化工、饲料改良剂、食品工业、生物柴油制备和医药工业中。
本发明涉及脂肪酶及其应用。具体而言，本发明提供一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，或由SEQ ID NO:2和用于促进SEQ ID NO:2所示氨基酸序列表达和纯化的序列组成。本发明还提供所述多肽的编码序列，含有所述编码序列的核酸构建物，含有所述核酸构建物的宿主细胞，以及相关的用途。本发明的脂肪酶具有优异的酶活性，还能天然固定在菌体上，在工业生产中具有优势。
本发明提供一种磷脂酶C突变体。具体而言，本发明提供一种分离的氨基酸序列，所述氨基酸序列含有：(1)SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列；或(2)在(1)所述的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，同时保留SEQ ID NO：8所具备的磷脂酶C活性的由(1)衍生的多肽。本发明也涉及所述氨基酸序列的编码序列、核酸构建体、宿主细胞以及相应的用途。
