本发明公开了一种磷酸酶突变体及在体外多酶催化麦芽糊精制备果糖中的应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸的第173位、175位或179位进行单点突变获得的。本发明以含磷酸酶突变体编码基因的工程菌发酵培养获得的湿菌体经超声破碎提取的酶液为催化剂，以麦芽糊精为底物，联合葡聚糖磷酸化酶、葡萄糖磷酸变位酶、葡萄糖磷酸异构酶，添加MgCl2和磷酸盐，以pH为7.5～8.5的缓冲液为反应介质构成反应体系，制备果糖，转化率达到70％以上，产物中果糖与副产物葡萄糖比例为11:1。底物专一性调控后的磷酸酶突变体在体外多酶合成系统生产果糖的绿色合成中具有重要工业应用潜力。
本发明公开了一种纤维二糖差向异构酶突变体及其应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第335位或第271位进行突变获得。本发明筛选得到一种耐高温纤维二糖差向异构酶突变体，增强了70℃下的酶半衰期，提高了酶对合成乳果糖所用底物乳糖的底物亲和力和转化效率。运用含有改造酶的基因工程菌进行生物转化，产物乳果糖得率显著增加。本发明展示了纤维二糖差向异构酶在合成乳果糖绿色环保、毒性低，副产物少和产物得率高的技术优势，经过分子改造获得的纤维二糖差向异构酶突变体扩展了相对稀少的乳果糖异构酶酶库，展示了重要的工业应用前景。
本发明公开了一种耐高温纤维二糖差向异构酶突变体、工程菌及其应用，所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第226位或第242位进行突变获得。本发明筛选得到一种耐高温纤维二糖差向异构酶突变体，增强了突变酶在70℃下的半衰期，提高了酶对合成乳果糖所用底物乳糖的底物亲和力和转化效率。运用含有改造酶的基因工程菌进行生物转化，产物乳果糖得率显著增加，副产物依匹乳糖得率明显降低。本发明展示了纤维二糖差向异构酶在合成乳果糖绿色环保、毒性低，副产物少和产物得率高的技术优势，经过分子改造获得的纤维二糖差向异构酶突变体具有重要的工业应用前景。
