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[发明专利]一种乙醇脱氢酶突变体及其应用-CN202210988745.8有效
发明人：王峰;陈倩;王俊超;桂文君;高敏奇 -专利权人：无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2022-08-17 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种乙醇脱氢酶突变体及其应用，涉及蛋白质工程技术领域，所述乙醇脱氢酶突变体由乙醇脱氢酶突变序列和N端依次融合HRV3C酶切位点和6His标签构成，所述突变序列中的突变为V63Y、T122L、G162Y、Q202M、A219M、D268N、N291M和A385M。本发明使其与野生型的乙醇脱氢酶相比具有更高的热稳定性，野生型Tm值为61.25℃、突变体Tm值为66.1℃，较野生型增加了近5℃，为该酶在工业生物催化制药过程中的应用提供了良好的应用场景。该突变体的蛋白产量也比野生型高出2倍。
一种乙醇脱氢酶突变体及其应用

[发明专利]SortaseA酶作为蛋白水解酶在蛋白纯化领域中的应用-CN202210808934.2有效
发明人：王峰;陈倩;桂文君;王俊超;黄亚亮 -专利权人：无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2022-07-11 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12N9/64 文献下载
摘要：本发明公开了SortaseA酶作为蛋白水解酶在蛋白纯化领域中的应用，涉及蛋白质工程技术领域，SortaseA酶作为蛋白水解酶的反应条件为：50mMTris‑HCl，pH7.5，500mMNaCl,5％glycerol,5mMDTT,0.1MTrehalose，1mMEDTA,5mMGlycine,1mMCaCl2。本发明提供了一种利用SortaseA酶水解酶活性作为一种新的蛋白水解酶在蛋白纯化过程中融合标签切除的应用。通过优化SortaseA酶的反应条件，增强其水解酶活性，从而使其作为一种新的蛋白水解酶，SortaseA与常用的TEV酶相比具有产量高、热稳定性高且酶切效率更高等特点且经Sortase酶酶切后的产物可以实现任一标记修饰如生物素标记、荧光标记等。
sortasea 作为蛋白水解纯化领域中的应用

[发明专利]一种改造的D-阿洛酮糖3-差向异构酶及其应用-CN202210856853.X有效
发明人：王峰;吕志佳;桂文君;陈倩;王俊超 -专利权人：无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2022-07-20 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种改造的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶及其应用，涉及蛋白质工程技术领域，该改造DTEase酶由DTEase序列和C端融合的多聚精氨酸标签构成，命名为DTEase‑5R。通过对解纤维素梭菌DTEase蛋白序列的C端添加RRRRR标签，使其产量比之前提高了5.5倍，Tm值增加了7℃，本发明提供的DTEase在工业生产D‑阿洛酮糖的应用中具有更好的应用场景。
一种改造阿洛酮糖差向异构及其应用

[发明专利]一种葡萄糖脱氢酶突变体及其应用-CN202310617801.1在审
发明人：王峰;陈倩;桂文君;王俊超;邵志鹏 -专利权人：无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2023-05-30 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种葡萄糖脱氢酶突变体及其应用，涉及蛋白质工程技术领域，所述葡萄糖脱氢酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的葡萄糖脱氢酶突变体通过将葡萄糖脱氢酶蛋白序列的第52位的精氨酸突变成天冬氨酸，第114位的甘氨酸突变成丙氨酸，第228位的脯氨酸突变成丙氨酸，第241位的丝氨酸突变成谷氨酰胺，使其与野生型的葡萄糖脱氢酶相比具有更高的热稳定性，野生型Tm值为63.74℃、突变体Tm值为79.3℃，较野生型增加了15℃，且突变体的辅酶也从无到有，其中NADP活性比野生型高出近6.5倍，NAD活性也比野生型高出3.4倍，为该酶在工业生物催化制药过程中的应用提供了良好的应用场景。
一种葡萄糖脱氢酶突变体及其应用

[发明专利]上转换发光材料在光学隐形防伪方面的应用方法-CN202111486352.9有效
发明人：徐霞;胡冰;桂文君;巩海鹏;付梅荣 -专利权人：甘肃农业大学
申请日： 2021-12-08 - 公布日： 2023-08-11 - 主分类号： C09K11/85 文献下载
摘要：一种上转换发光材料在光学隐形防伪方面的应用方法，其特征在于：用NaYF4:Yb3+/Er3+纳米晶和Nd3+离子掺杂的NaYF4:Nd3+/Yb3+/Er3+纳米晶或Mn2+离子掺杂的NaYF4:Mn2+/Yb3+/Er3+纳米晶和Nd3+离子掺杂的NaYF4:Nd3+/Yb3+/Er3+纳米晶叠加绘制图案，在特定激发光波长980 nm、808 nm下实现图案不同区域的光学分布显示从而实现叠加图案的暗码信息的光学双层防伪的应用方法。本发明使用的纳米晶分散性好，稳定性好，光学性能稳定，且上转换荧光为锐线光谱，应用于光学分布显示及暗码信息的双层防伪分辨率高。
转换发光材料光学隐形防伪方面应用方法

[发明专利]一种重组SortaseA酶及其固定化方法和应用-CN202310360094.2在审
发明人：王峰;陈倩;桂文君;高敏奇;黄亚亮 -专利权人：无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2023-04-06 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明属于生物工程领域，具体公开了一种重组SortaseA酶及其固定化方法和应用，通过在SortaseA酶的末端引入一个半胱氨酸，利用巯基共价偶联的原理，将SortaseA酶固定到商品化的偶联树脂上，反应结束后，只需要通过简单的离心方法，即可将SortaseA酶去除，该方法大幅度地减少了操作的时间、实现了基本以零成本的方式去除了反应中多余的SortaseA酶，提高了SortaseA酶在蛋白质的合成与修饰中的应用价值。
一种重组 sortasea 及其固定方法应用

[发明专利]一种葡萄糖脱氢酶突变体及其蛋白质晶体和应用-CN202210396377.8有效
发明人：王峰;王俊超;桂文君;成望;吕志佳 -专利权人：无锡佰翱得生物科学股份有限公司
申请日： 2022-04-15 - 公布日： 2023-07-21 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明属于生物工程领域，具体公开了一种葡萄糖脱氢酶突变体及其蛋白质晶体和应用，即提供了一种以葡萄糖为底物的来源于氧和葡萄球菌的葡萄糖脱氢酶突变体，该突变体通过将葡萄糖脱氢酶蛋白序列的第259位的天冬氨酸突变成半胱氨酸，使其与野生型的葡萄糖脱氢酶相比具有更高的热稳定性，野生型Tm值为64℃、突变体Tm值为73℃，较野生型增加了近10℃，且突变体的产量也比野生型高出2倍。此外，本发明还提供了该酶的蛋白质晶体，为进一步改造高活性、高稳定性的葡萄糖脱氢酶提供了研究基础。
一种葡萄糖脱氢酶突变体及其蛋白质晶体应用

[发明专利]一种增强型单体StayGold蛋白及其应用-CN202210949273.5在审
发明人：王峰;吴家权;陈倩;杨益虎;桂文君 -专利权人：无锡佰翱得生物科学有限公司
申请日： 2022-08-09 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明公开了一种增强型单体StayGold蛋白及其应用，涉及重组蛋白技术领域，该增强型单体StayGold蛋白序列为野生型二体StayGold蛋白的突变序列，且所述突变序列中的突变为N137、Q140、Y187中至少一个氨基酸进行突变成任意氨基酸。本发明首次提供了一种新的单体的StayGold蛋白，mStayGold，该绿色荧光蛋白具有很强的热稳定性和荧光强度，其Tm约为95℃，比市场上常用的EGFP的Tm值高出15℃，与二体的StayGold的热稳定相当，产量也高出2.5倍；其荧光强度也比常用EGFP的荧光强度高5倍。其单体的性质解决了其野生型二体蛋白在与目标蛋白融合进行追踪和定位目标蛋白时因自身聚集状态影响标记和定位的功能，在指导蛋白表达、细胞定位等应用中具有更好的应用场景。
一种增强单体 staygold 蛋白及其应用

[发明专利]一种改性秸秆阴离子吸附材料及其制备方法与应用-CN202210645561.1有效
发明人：常彦龙;石赟;桂文君 -专利权人：兰州大学
申请日： 2022-06-09 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： B01J20/24 文献下载
摘要：本发明属于农业废弃物处理及废水处理技术领域，具体公开了一种改性秸秆阴离子吸附材料及其制备方法与应用。本发明先将秸秆与氯化锌熔融盐体系混合反应，然后再以环氧氯丙烷和三乙胺发生醚化交联反应，在纤维素上接入季胺基团，得到改性秸秆阴离子吸附材料。得到的改性秸秆阴离子吸附材料对硝酸根的去除效果良好，吸附容量大，最大吸附容量可以达到1.48mmol/g，同时，本发明还可以实现“以废治废”的治理，避免农作物废弃物带来的污染问题。
一种改性秸秆阴离子吸附材料及其制备方法应用

[发明专利]一种增强型StayGold黄色荧光蛋白及其应用-CN202211332706.9在审
发明人：王峰;杨益虎;陈倩;桂文君;吕志佳 -专利权人：无锡佰翱得生物科学有限公司;佰翱得（无锡）新药开发有限公司
申请日： 2022-10-28 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明公开了一种增强型StayGold黄色荧光蛋白及其应用，涉及重组蛋白技术领域，该增强型StayGold黄色荧光蛋白为StayGold的氨基酸序列中包含了192位赖氨酸突变酪氨酸氨基酸，即可将绿色的荧光StayGold蛋白变成黄色的YStayGold。本发明提供的YStayGold的最大激发波长为500nm，最大发射波长为515nm。本发明提供的YStayGold具有很强的热稳定性，Tm大于95℃。比市场上常用的YFP黄色荧光蛋白的Tm值高出15℃，且荧光强度也高出8倍，说明YStayGold黄色荧光蛋白明显比市场上常用的YFP黄色荧光蛋白具有更广阔的应用市场。
一种增强 staygold 黄色荧光蛋白及其应用

[发明专利]一种高通量筛选蛋白表达的方法及其应用-CN202210973257.X在审
发明人：王峰;陈倩;桂文君 -专利权人：无锡佰翱得生物科学有限公司
申请日： 2022-08-15 - 公布日： 2023-04-11 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明公开了一种高通量筛选蛋白表达的方法及其应用，涉及生物工程技术领域，所述蛋白的N端或C端含有His标签，将待测蛋白的表达上清与HIS Lite混合后，利用FSEC系统进行检测，获得待测蛋白表达检测结果和聚集状态初步判断结果。本发明首次使用荧光标记的HIS Lite作为荧光染料，直接将其与含有His标签的蛋白的细胞上清液混合，使用FSE C系统，可实现高通量筛选蛋白表达的最佳表达质粒和表达条件，获得了纯度好的蛋白，且该蛋白还可以被多功能标记。
一种通量筛选蛋白表达方法及其应用

[发明专利]一种内皮素受体A融合突变体蛋白及其应用-CN202210991877.6在审
发明人：王峰;刘宝平;吴家权;桂文君;司焕;陈倩 -专利权人：无锡佰翱得生物科学有限公司
申请日： 2022-08-17 - 公布日： 2023-03-03 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种内皮素受体A融合突变体蛋白及其应用，涉及蛋白质表达技术领域，所述融合突变体蛋白EDNRA由以下(1)‑(3)构成：(1)内皮素受体A突变序列；(2)N端的信号肽序列替换为HA信号肽序列后依次加入TEV酶切位点和Flag标签；(3)C端添加3C酶切位点后依次加入GFP蛋白序列和10His标签蛋白序列。本发明利用被重组家蚕杆状病毒感染的家蚕幼虫高效表达融合蛋白，比直接用原核生物表达的活性高，比通过转基因植物表达的产率高；家蚕是可以无菌大规模饲养经济昆虫，可以低成本、大规模饲养，而且不会造成公害；蚕体中有多重天然蛋白质保护剂，对表达产物有保护作用，使基因表达产物更加稳定。
一种内皮受体融合突变体蛋白及其应用

[发明专利]一种基于蛋白连接酶的高通量检测蛋白表达的方法-CN202111549052.0有效
发明人：吴家权;高敏奇;桂文君;欧阳莹;沈梦露 -专利权人：无锡佰翱得生物科学有限公司
申请日： 2021-12-17 - 公布日： 2023-01-17 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于蛋白连接酶的高通量检测蛋白表达的方法，涉及生物工程技术领域，将待测蛋白、蛋白连接酶和荧光多肽底物混合，利用蛋白连接酶连接携带识别序列的目的蛋白质和荧光多肽底物，获得待测蛋白表达检测结果，蛋白连接酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用识别PGA(15)基序的特异性蛋白连接酶(connectase)直接将荧光多肽底物连接到目标蛋白上，利用荧光标记的多肽底物在特定波长激发荧光下，可以即刻观察到目的蛋白表达情况，基于连接酶的方法可以更快速、灵敏、和特异地检测目的蛋白情况。
一种基于蛋白连接酶通量检测表达方法

[实用新型]一种自动化置换缓冲液的超滤浓缩仪-CN202221620972.7有效
发明人：王峰;吴家权;黄亚亮;桂文君;陈倩 -专利权人：无锡佰翱得生物科学有限公司
申请日： 2022-06-27 - 公布日： 2022-11-04 - 主分类号： B01D61/14 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种自动化置换缓冲液的超滤浓缩仪，包括超滤装置、进样管、缓冲液管、气泡检测器、流路切换阀、三口密封瓶、OEM齿轮泵和控制单元；所述进样管和缓冲液管通过依次连接的流路切换阀和进液管连接至三口密封瓶的进口一内，所述三口密封瓶的出口通过出液管依次与OEM齿轮泵和超滤装置的入口连接，所述超滤装置的出口通过排液管与三口密封瓶的进口二连接；所述气泡检测器设置于进样管和缓冲液管上，并与控制单元通信连接，控制单元控制流路切换阀。本实用新型将气泡检测器和流路切换阀连用，可以防止看守不及时造成进气对蛋白的损伤，实现了超滤浓缩的全自动化，降低了蛋白在纯化过程中性质变化，提高了蛋白质量。
一种自动化置换缓冲液超滤浓缩

[发明专利]氯化铁化合物在溶解秸秆中的应用及一种秸秆的处理方法-CN202210639216.7在审
发明人：常彦龙;石赟;桂文君 -专利权人：兰州大学
申请日： 2022-06-08 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： B09B3/70 文献下载
摘要：本发明属于农业废弃物处理技术领域，本发明提供了氯化铁化合物在溶解秸秆中的应用及一种秸秆的处理方法。秸秆的处理方法包括以下步骤：将FeCl3与水混合熔融，得到FeCl3·nH2O熔融液；将秸秆加入到FeCl3·nH2O熔融液进行溶解，即完成秸秆的处理；其中，n为1～6之间的整数。本发明在溶解秸秆纤维时不需要对秸秆纤维进行预处理或活化，处理过程简单，在低温下即可进行，并且FeCl3·nH2O熔融液无毒无污染，可全部回收再次利用。
氯化铁化合物溶解秸秆中的应用一种处理方法

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