本发明涉及病毒检测技术领域,具体公开一种RF‑RAA检测鸭圆环病毒的引物和探针组合及其应用。所述检测鸭圆环病毒的引物和探针中,上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示,探针的序列如SEQ ID NO:3所示。本发明针对DuCV的保守基序设计特异性引物和探针,建立了一种应用于检测DuCV的RF‑RAA方法,使扩增产物累积与荧光信号强弱呈正相关,在41℃下反应15min可经仪器观察到明显结果,且方法的特异性强、灵敏度高、最低检测限可达1拷贝/μL,准确度好,对鸭圆环病毒的早期临床检测和流行病学调查提供了可靠保障,对疫病防控有积极意义。