本发明提供一种曲霉菌的引物探针组合及应用、PCR反应液，所述曲霉菌的引物探针组合用于检测四种曲霉菌，包括第一引物探针组合和第二引物探针组合，核苷酸序列如SEQ ID NO：1‑12所示。第一引物探针组合包括针对烟曲霉菌的第一上游引物、第一下游引物和第一探针，以及针对土曲霉菌的第二上游引物、第二下游引物和第二探针；第二引物探针组合包括针对黄曲霉菌的第三上游引物、第三下游引物和第三探针，以及针对黑曲霉菌的第四上游引物、第四下游引物和第四探针。本发明提供的曲霉菌的引物探针组合针对四种曲霉菌菌种内保守区域，设计并筛选得到进行特异性扩增的引物和探针，减小了不同引物之间的相互作用，提高了扩增的特异性和灵敏度。
本发明提供一种念珠菌的引物探针组合，用于检测四种念珠菌，包括第一引物探针组合和第二引物探针组合，核苷酸序列如SEQ ID NO：1‑12所示。第一引物探针组合包括针对白念珠菌的第一上游引物、第一下游引物和第一探针，以及针对光滑念珠菌的第二上游引物、第二下游引物和第二探针；第二引物探针组合包括针对近平滑念珠菌的第三上游引物、第三下游引物和第三探针，以及针对热带念珠菌的第四上游引物、第四下游引物和第四探针。本发明提供的念珠菌的引物探针组合减小了不同引物之间的相互作用，提高了扩增的特异性和灵敏度。
本发明提供了一种锚定巢式多重PCR联合高通量测序检测基因融合的多重PCR引物，包括多重PCR特异性引物组1和多重PCR特异性引物组2，所述多重PCR特异性引物组1为SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:32所示的核苷酸序列组成的引物组，所述多重PCR特异性引物组2为SEQ ID NO:33～SEQ ID NO:64所示的核苷酸序列组成的引物组。本发明还提供了一种锚定巢式多重PCR联合高通量测序检测基因融合的多重PCR引物和方法，本发明检测方法通用性更高，本发明检测方法能够在仅部分知晓或未知晓融合基因结构的情况下，准确灵敏地检测融合基因。
本发明公开了一种遗传性结直肠癌易感基因检测用的多重PCR引物系统、检测方法和应用。该遗传性结直肠癌易感基因检测用的多重PCR引物系统，包括第一多重PCR引物组合和/或第二多重PCR引物组合；其中，第一多重PCR引物组合含有112对PCR引物对，且该112对PCR引物对的序列分别如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:224所示；第一多重PCR引物组合含有113对PCR引物对，且该113对PCR引物对的序列分别如SEQ ID NO:225～SEQ ID NO:450所示。本发明的多重PCR引物系统能同时检测结直肠癌相关的11个易感基因，各引物之间相互干扰性小，特异性强，扩增效果好，可提高检测效率，降低检测成本，并且可配合高通量测序技术，进行高通量测序，对结直肠癌易感人群，尤其是具有结直肠癌家族遗传史的人群有一定的辅助诊断和提示作用。
本发明提供了一种扩增BRCA1/2基因的多重PCR引物及一种多重PCR引物的设计方法，所述多重PCR引物包括SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:234所示的核苷酸序列。本发明还提供了一种多重PCR引物的设计方法。本发明提供的多重PCR引物可以快速的完成BRCA1/2目标序列的富集，进而进行NGS文库构建和测序，实现高度自动化、高通量的遗传性乳腺癌BRCA1/2基因检测。
