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[发明专利]一种L-2-氨基丁酸的制备方法-CN201910246388.6有效
发明人：郭恒华;刘磊;张冬竹;刘树蓬;章晖;田宋魁 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司
申请日： 2019-03-29 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C12P13/04 文献下载
摘要：本发明属于酶催化领域，尤其涉及一种L‑2‑氨基丁酸的制备方法，在底物中加入酶催化剂和酶激活剂，所述底物为苏氨酸和甲酸铵，所述酶催化剂为苏氨酸脱氨酶、亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶，所述酶激活剂为磷酸盐。上述制备L‑2‑氨基丁酸的方法，采用磷酸盐作为酶激活剂，与亮氨酸脱氢酶配合使用，将反应的中间产物迅速转化，使三种酶的催化速率相互匹配，提高了酶催化的转化效率，避免了副产物的堆积现象，不仅提高了产物的收率，更加有利于产物的分离提纯。
一种氨基丁酸制备方法

[发明专利]生产L-缬氨酸的重组微生物及构建方法、应用-CN202210084699.9有效
发明人：张学礼;郭恒华;刘萍萍;张冬竹;唐金磊;韩成秀;唐思青;刘树蓬;马延和 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司;中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2020-05-13 - 公布日： 2023-06-20 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明涉及生产L‑缬氨酸的重组微生物的构建方法，通过向微生物中导入NADH依赖型乙酰羟酸异构还原酶基因和NADH依赖型氨基酸脱氢酶基因，使得乙酰羟基还原异构酶和氨基酸脱氢酶的活性增强，并敲除出发微生物内源性的酶基因；本发明通过调控缬氨酸竞争代谢结合还原力平衡的L‑缬氨酸合成路径，能够提高大肠杆菌生产L‑缬氨酸的产量和转化率，且可实现一步法厌氧发酵L‑缬氨酸。
生产缬氨酸重组微生物构建方法应用

[发明专利]生产L-缬氨酸的重组微生物及构建方法、应用-CN202210084710.1有效
发明人：张学礼;郭恒华;刘萍萍;张冬竹;唐金磊;韩成秀;唐思青;刘树蓬;马延和 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司;中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2020-05-13 - 公布日： 2023-06-20 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明涉及生产L‑缬氨酸的重组微生物的构建方法，通过向微生物中导入NADH依赖型乙酰羟酸异构还原酶基因和NADH依赖型氨基酸脱氢酶基因，同时乙酰羟基还原异构酶和氨基酸脱氢酶的活性增强，能够提高大肠杆菌生产L‑缬氨酸的产量和转化率，且可实现一步法厌氧发酵L‑缬氨酸。
生产缬氨酸重组微生物构建方法应用

[发明专利]一种产L-缬氨酸的黄色短杆菌及利用该菌生产L-缬氨酸的方法-CN201911084280.8有效
发明人：韩成秀;张学礼;杨林;郭恒华;张冬竹;刘树蓬 -专利权人：巴彦淖尔华恒生物科技有限公司;安徽华恒生物科技股份有限公司
申请日： 2019-11-07 - 公布日： 2022-11-08 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种产L‑缬氨酸的黄色短杆菌，所述黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)已于2019年07月01日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2019496，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。本发明还涉及一种利用上述黄色短杆菌生产L‑缬氨酸的方法，将所述黄色短杆菌菌株，经过活化培养、种子液培养，所得种子液接入发酵培养基进行发酵培养，所述发酵培养过程是先进行需氧发酵，再进行厌氧发酵。采用本发明保藏的菌种及生产方法进行L‑缬氨酸生产，产量高，糖酸转化率高，且发酵过程用时短，大大提高了生产效率。
一种缬氨酸黄色杆菌利用生产方法

[发明专利]生产L-缬氨酸的重组大肠杆菌及其应用-CN202010460035.9有效
发明人：张学礼;郭恒华;刘萍萍;张冬竹;唐金磊;韩成秀;唐思青;刘树蓬;马延和 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司;中国科学院天津工业生物技术研究所;巴彦淖尔华恒生物科技有限公司
申请日： 2020-05-27 - 公布日： 2022-10-21 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明通过增强L‑缬氨酸发酵菌株的氨基酸脱氢酶活性，和/或激活恩特纳‑杜德洛夫代谢(Entner‑Doudoroff，ED)途径，解决了L‑缬氨酸发酵过程中的还原力不平衡的问题，从而提高大肠杆菌生产L‑缬氨酸的产量和转化率，并实现一步法厌氧发酵L‑缬氨酸。
生产缬氨酸重组大肠杆菌及其应用

[发明专利]一种L-酪氨酸的制备方法-CN201910246367.4有效
发明人：韩成秀;郭恒华;张冬竹;刘树蓬;章晖;田宋魁 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司
申请日： 2019-03-29 - 公布日： 2022-10-21 - 主分类号： C12P13/22 文献下载
摘要：本发明属于酶催化领域，具体涉及一种L‑酪氨酸的制备方法，以L‑丙氨酸和苯酚为原料，以D‑氨基酸氧化酶、丙氨酸消旋酶、过氧化氢酶和酪氨酸酚裂解酶为催化剂，以含氧气体为氧化剂，多酶偶联合成L‑酪氨酸。采用上述方案，反应简单、易于操作；底物L‑丙氨酸和苯酚都是较为经济和便于获得的原料，L‑丙氨酸市售价格约为两万元每吨，与现有技术中以丙酮酸为底物的制备方法相比，成本投入更低；中间产物丙酮酸和氨根离子又进一步参与到后续反应中，无中间产物堆积现象，并且中间产物的消耗也进一步加快了L‑丙氨酸的反应速率；最终产物L‑酪氨酸生成后即在混合液中结晶，便于分离提纯。
一种酪氨酸制备方法

[发明专利]一种丙氨酸脱氢酶突变体及其在发酵生产L-丙氨酸中的应用-CN201910243105.2有效
发明人：张学礼;郭恒华;马延和;张冬竹;刘萍萍 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司;中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2019-03-28 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12N9/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种丙氨酸脱氢酶突变体及其在发酵生产L‑丙氨酸中的应用。本发明的丙氨酸脱氢酶突变体是将丙氨酸脱氢酶氨基酸序列的第327位的赖氨酸突变为天冬酰胺后得到的蛋白质。本发明基于代谢驯化的筛选技术获得活性显著提高的丙氨酸脱氢酶突变体，并将其用于L‑丙氨酸工程菌株的构建和L‑丙氨酸的高效发酵。实验证明：本发明提供的菌株的L‑丙氨酸产量和L‑丙氨酸脱氢酶的酶活性均大大提高，相对于表达野生型丙氨酸脱氢酶的菌株提高了88.2％，可以有效改善L‑丙氨酸工程菌株的发酵能力和L‑丙氨酸的产量，具有重大的应用价值。
一种丙氨酸脱氢酶突变体及其发酵生产中的应用

[发明专利]生产L-缬氨酸的重组大肠杆菌、其构建方法及其应用-CN202010466347.0有效
发明人：张学礼;郭恒华;刘萍萍;张冬竹;唐金磊;韩成秀;唐思青;刘树蓬;马延和 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司;中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2020-05-27 - 公布日： 2022-06-21 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及生产L‑缬氨酸的重组微生物的构建方法，通过引入氨基酸脱氢酶基因，和/或激活转氢酶、和/或NAD激酶的活性，以增加细胞NADPH还原力，提高大肠杆菌生产L‑缬氨酸的产量和转化率，并实现一步法厌氧发酵L‑缬氨酸。
生产缬氨酸重组大肠杆菌构建方法及其应用

[发明专利]生产L-缬氨酸的重组微生物及构建方法、应用-CN202010401422.5有效
发明人：张学礼;郭恒华;刘萍萍;张冬竹;唐金磊;韩成秀;唐思青;刘树蓬;马延和 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司;中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2020-05-13 - 公布日： 2022-05-17 - 主分类号： C12N15/90 文献下载
摘要：本发明涉及生产L‑缬氨酸的重组微生物的构建方法，通过向微生物中导入乙酰羟酸异构还原酶基因和/或氨基酸脱氢酶基因，同时增强乙酰羟基还原异构酶和氨基酸脱氢酶的活性，能够提高大肠杆菌生产L‑缬氨酸的产量和转化率，且可实现一步法厌氧发酵L‑缬氨酸。
生产缬氨酸重组微生物构建方法应用

[发明专利]一种D-泛解酸内酯的生产方法-CN201910246361.7有效
发明人：郭恒华;张冬竹;刘磊;刘树蓬;杨林;章晖;田宋魁 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司
申请日： 2019-03-29 - 公布日： 2022-04-01 - 主分类号： C12P17/04 文献下载
摘要：本发明属于生物合成技术领域，尤其涉及一种D‑泛解酸内酯的生产方法，以DL‑泛解酸内酯和含钙化合物为原料制备D‑泛解酸钙，再加入酸性溶液将D‑泛解酸钙酸解，即得D‑泛解酸内酯溶液。采用上述方案制备的D‑泛解酸内酯，所得D‑泛解酸内酯光学纯度高，生产方法简单，L‑泛解酸内酯仍然可以回收利用，尤其是避免了采用有机溶剂萃取中间产物而导致的高成本和高污染，适合在工业大生产中大力推广。
一种泛解酸内酯生产方法

[发明专利]一株高产L-丙氨酸的菌株-CN201811087267.3有效
发明人：张学礼;马延和;郭恒华;刘萍萍;张冬竹;徐洪涛;唐思青;刘洋 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司;中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2018-09-18 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N9/06 文献下载
摘要：本发明公开了一株高产L‑丙氨酸的菌株。本发明提供的高产L‑丙氨酸的菌株的制备方法为使出发菌中蛋白质的表达量和/或活性提高，得到的重组菌。所述蛋白质为将alaD蛋白氨基酸序列中第10位、第239位和第197位这3位中至少一位的氨基酸残基进行替换，得到具有丙氨酸脱氢酶活性的蛋白质；所述alaD蛋白的氨基酸序列如序列表中的序列4所示。实验证明，本发明提供的菌株的L‑丙氨酸产量和L‑丙氨酸脱氢酶的酶活性均大大提高，可以有效改善L‑丙氨酸工程菌株的发酵能力和L‑丙氨酸的产量。本发明具有重大的应用价值。
高产丙氨酸菌株

[发明专利]天冬氨酸酶变体及其制备方法与应用-CN202110768059.5在审
发明人：吴边;刘洋;李瑞峰;张冬竹;刘志成;章晖 -专利权人：秦皇岛华恒生物工程有限公司
申请日： 2017-08-04 - 公布日： 2021-09-21 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种天冬氨酸酶变体及其制备方法与应用。本发明所提供的天冬氨酸酶变体其氨基酸序列与序列表中序列2相比具有96％以上同一性，且在序列2的第187位和326位分别存在T187I和N326C的突变，并且与序列2所示的天冬氨酸酶相比具有改善的催化丙烯酸加氨活性。实验证明，本发明所提供的天冬氨酸酶变体与野生型亲本天冬氨酸酶相比确实具有改善的催化丙烯酸加氨活性，且热稳定性和pH谱更优，在丙烯酸加氨反应中可以大大提高丙烯酸的转化率。
天冬氨酸变体及其制备方法应用

[发明专利]天冬氨酸酶变体及其制备方法与应用-CN201710659654.9有效
发明人：吴边;刘洋;李瑞峰;张冬竹;刘志成;章晖 -专利权人：秦皇岛华恒生物工程有限公司
申请日： 2017-08-04 - 公布日： 2021-07-27 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种天冬氨酸酶变体及其制备方法与应用。本发明所提供的天冬氨酸酶变体其氨基酸序列与序列表中序列2相比具有96％以上同一性，且在序列2的第187位和326位分别存在T187I和N326C的突变，并且与序列2所示的天冬氨酸酶相比具有改善的催化丙烯酸加氨活性。实验证明，本发明所提供的天冬氨酸酶变体与野生型亲本天冬氨酸酶相比确实具有改善的催化丙烯酸加氨活性，且热稳定性和pH谱更优，在丙烯酸加氨反应中可以大大提高丙烯酸的转化率。
天冬氨酸变体及其制备方法应用

[发明专利]一种一步催化加氢制备γ-氨基丙醇的方法及其应用-CN202110562414.3在审
发明人：刘树蓬;刘磊;张冬竹 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司;合肥华恒生物工程有限公司
申请日： 2021-05-24 - 公布日： 2021-07-16 - 主分类号： C07C213/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种一步催化加氢制备γ‑氨基丙醇的方法，包括如下步骤，在金属催化剂存在条件下，β‑丙氨酸与氢气在反应溶剂中发生加氢反应，即得。本发明的方法具有收率高、制得的γ‑氨基丙醇纯度高，并具有操作简便，原料价廉易得、安全可控、绿色环保、成本更优，适合工业化生产等优点，且显著提高γ‑氨基丙醇制备产品的质量、收率、有效性和安全性。
一种一步催化加氢制备氨基丙醇方法及其应用

[发明专利]用于鱼露的调味料及其制备方法-CN201711476721.X有效
发明人：郭恒华;张冬竹;田宋魁;章晖 -专利权人：安徽华恒生物科技股份有限公司
申请日： 2017-12-29 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： A23L27/50 文献下载
摘要：本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种用于鱼露的调味料及其制备方法；包括如下质量份数的原料：酵母抽提物1‑6份，酸性蛋白酶0.5‑1.5份，5'‑呈味核苷酸二钠(I+G)0.1‑0.5份，钠盐5‑15份，氨基酸A2‑7份，氨基酸B 0.5‑2份，各原料在热反应环境中发生美拉德反应、斯特雷克尔降解反应和焦糖化反应，形成一种风味独特的调味料，在鱼露、海鲜酱等调味品中进行添加时可以有效降低产品原有的腥味，提高产品的食用风味。
用于调味料及其制备方法

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