本发明属于分子生物学领域,具体涉及一种碱性纤维素酶及其制备方法和应用。本发明的碱性纤维素酶的基因来源于真正的碱性纤维质环境碱性腌竹池,碱性纤维素酶具体制备方法为:通过分子生物学手段获取样品的宏基因组;再高通量测序获得碱性纤维素酶的基因序列;然后将碱性纤维素酶基因扩增并整合至表达载体中,该载体转化宿主细胞;最后再培养已转化的细胞得到的发酵液中提取即得。本发明的碱性纤维素酶核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,与现有纤维素酶相似性不超过49%,在中碱性PH条件下具有较高酶活,应用于纺织抛光亦有很好效果,在纺织、洗涤、造纸等行业应用效果也很明显。