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[发明专利]基于靶向区域辅助支撑的卵母细胞显微操作系统及方法-CN201810486077.2有效
发明人：黄海波;闫肃;周飞;金国庆;刘吉柱;王则涵;郭浩;孙立宁 -专利权人：苏州大学
申请日： 2018-05-18 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于靶向区域辅助支撑的卵母细胞显微操作系统及方法，所述显微操作系统包括：真空吸附式悬浮细胞夹持装置，包括旋转平台、设于旋转平台上的螺旋电极、以及设于旋转平台上的真空泵，所述螺旋电极中心设有用于对卵母细胞进行真空吸附的操作区域，所述真空泵控制所述操作区域对卵母细胞进行真空吸附；卵母细胞靶向区域辅助支撑装置，用于对卵母细胞靶向区域透明带进行辅助支撑；压电超声卵母细胞显微操作装置，用于对卵母细胞进行辅助支撑后对卵母细胞的具体显微操作。本发明由于卵母细胞透明带靶向区域有了辅助支撑，透明带穿刺时可以精确定位，结合显微视觉技术，可以真正实现细胞内定点化操作。
基于靶向区域辅助支撑细胞显微操作系统方法

[发明专利]一种全雄不育尼罗罗非鱼品系及其构建方法-CN202211200006.4在审
发明人：周林燕;杨兰英;吴忧;张雪锋 -专利权人：西南大学
申请日： 2022-09-29 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明提供了一种全雄不育尼罗罗非鱼品系及其构建方法，所述全雄不育尼罗罗非鱼品系是CRISPR/Cas9基因编辑获得的尼罗罗非鱼类固醇合成酶编码基因cyp17a1纯合敲除系。本发明首次成功建立的cyp17a1纯合敲除突变系完全摆脱了对雄激素处理的依赖，是环境友好、生态绿色的养殖候选品种。同时不育和快速生长，可以避免突变鱼在野外养殖过程中造成野生遗传资源的污染，并且节约成本提高养殖效益。本发明提供的cyp17a1纯合敲除系还将为鱼类乃至脊椎动物研究性别分化、不育提供一个基因功能缺失平台，这个平台将有助于进一步认识cyp17a1基因作用机制。
一种不育罗罗品系及其构建方法

[发明专利]用于核移植盲吸法去核体积的度量方法-CN202010647703.9有效
发明人：郭延华;张译元;王立民;唐红;刘长彬;张宾;卢守亮;周平;王新华 -专利权人：新疆农垦科学院
申请日： 2020-07-07 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种体细胞核移植受体细胞染色体和胞质精确去除量的计量方法。用于核移植盲吸法去核体积的度量方法，主要包括以下步骤:卵母细胞采集与成熟；准备去核工具；首先将成熟的卵母细胞进行染色，然后用去核针度量去核染色体和第一极体以及周围细胞质的量，进行盲吸法去核；只进行一次紫外观察，观察染色体与第一极体是否去除或者卵母细胞是否还含有染色体，观察到未去核干净的卵母细胞直接丢弃。本发明在核移植盲吸法去核操作中,使操作员能够进行量化去核体积,可对去核进行精确度量,而且减少对卵母细胞染色紫外示核的次数，降低对卵母细胞损伤，提高重构胚后期发育质量，经济实用、操作方便。
用于移植盲吸法去核体积度量方法

[发明专利]用于核移植盲吸法去核体积的数学模型构建方法-CN202010647827.7有效
发明人：郭延华;皮文辉;万鹏程;王立民;甘尚权;张译元;唐红;倪建宏;代蓉;周平;王新华 -专利权人：新疆农垦科学院
申请日： 2020-07-07 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于核移植盲吸法去核体积的数学模型构建方法，主要包括以下步骤:将绵羊排出第一极体的成熟卵母细胞移入染色液中染色，放入显微镜下观察染色体与第一极体的相对位置，呈现一定规律等；在不同时间段,成熟卵母细胞染色体与第一极体的距离关系；不同时间段成熟卵母细胞去核体积比计算；不同时间段卵母细胞去核量在去核针中的理论度量；成熟卵母细胞核移植去核的实际度量值的简化。本发明可以在核移植盲吸法去核操作中,使操作员能够进行量化去核体积,可对去核量进行精确度量,而且减少对卵母细胞染色紫外示核的次数，降低对卵母细胞损伤，提高重构胚后期发育质量，其推演合理、经济实用。
用于移植盲吸法去核体积数学模型构建方法

[发明专利]一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法-CN202211457317.9在审
发明人：刘鑫;苗义良;周凯;王婷婷;张霞 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2022-11-21 - 公布日： 2023-04-11 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于过表达转录因子提高猪克隆效率的载体及方法，涉及哺乳动物体细胞克隆技术领域。本发明提供的载体为猪转录因子LEUTX的体外转录载体，应用该载体可体外获取大量该转录因子LEUTX的mRNA。在猪体细胞克隆胚电激活后5h，通过向克隆胚显微注射LEUTX的mRNA，可以有效增强体细胞克隆胚组蛋白乙酰化H3K27ac这一表观遗传修饰的富集水平，显著促进猪体细胞克隆囊胚的体外发育，胚胎移植后克隆猪的出生率也显著提高。
一种基于表达转录因子提高克隆效率载体方法

[发明专利]一种提高体细胞核移植发育效率的药物及应用-CN202310020585.2在审
发明人：张守全;马君艳;石俊松;苏巧云;周荣;麦然标;罗绿花;纪红美;余婉娴;蔡更元 -专利权人：华南农业大学;广东温氏种猪科技有限公司
申请日： 2023-01-06 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明公开了提供了一种提高体细胞核移植发育效率的药物，该药物为HDACs/mTORInhibitor1，其化学式为C28H38N8O5。可以通过添加该双靶点药物在体细胞培养液中，通过诱导体细胞自噬激活，来清除体细胞内受损线粒体，抑制体细胞衰老和凋亡；也可以提高体细胞同期性和表观修饰水平，使体细胞基因组易和转录因子结合，提高重编程效率，同时进一步提高体细胞自噬水平，并通过协同作用，提高供体细胞质量和表观修饰状态，从而提高体细胞核移植胚胎的发育效率。
一种提高体细胞移植发育效率药物应用

[发明专利]一种构建降低高糖诱导斑马鱼细胞凋亡模型的方法-CN202211258491.0在审
发明人：曹建斌;朱敏淑;卢睿;顾珊烨;项海飞;林峰;王明仓 -专利权人：台州恩泽医疗中心（集团）
申请日： 2022-10-14 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明涉及一种构建降低高糖诱导斑马鱼细胞凋亡模型的方法，属于基因敲除技术领域。为了解决现有的针对高糖诱导下的斑马鱼模型的构建没有涉及，提供一种构建降低高糖诱导斑马鱼细胞凋亡模型的方法，该方法包括：选择在斑马鱼的tspo基因的第一个外显子上设计靶点，设计tspo基因敲除sgRNA靶点序列，PCR扩增，获得sgRNA体外转录模板；将sgRNA体外转录模板及Cas9配成混合液，于野生型斑马鱼胚胎一细胞期时进行注射，养殖获得F0代斑马鱼；与AB野生型斑马鱼外交获F1代斑马鱼；筛选F1代杂合子斑马鱼，再内交获得F2代斑马鱼并筛选F2代纯合子斑马鱼。构建的模型在高糖诱导后细胞凋亡数目呈现出显著减少的特性。
一种构建降低诱导斑马细胞模型方法

[发明专利]一种基于微流道的机器人化体细胞核移植操作方法-CN201910449314.2有效
发明人：孙明竹;刘曜玮;赵新;王雪锋;赵启立;崔茂盛 -专利权人：南开大学
申请日： 2019-05-28 - 公布日： 2022-09-30 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：一种基于微流道的机器人化体细胞核移植操作方法。该方法的特点是引入的微流道用于存储细胞，引入了平行的双针分别用于细胞去核以及注核。该方法包括以下关键步骤：细胞的微流道存储，细胞的定位，细胞吸持，细胞去核，去核针与注核针的转换，细胞注核，最后释放已操作的细胞。实验结果表明该流程较传统体细胞核移植流程节约了41.7％的时间，并与手动体细胞核移植的存活率、成功率一致，有效的提升了体细胞核移植的效率与可重复性。
一种基于微流道机器人化体细胞移植操作方法

[发明专利]hoxa1a基因敲除斑马鱼突变体的构建方法和应用-CN202210760760.7在审
发明人：祖尧;贺经纬 -专利权人：上海海洋大学
申请日： 2022-06-30 - 公布日： 2022-08-23 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明公开了hoxa1a基因敲除斑马鱼突变体的构建方法和应用，通过CRISPR技术构建，依次包括设计gRNA位点—PCR扩增—gRNA的模板纯化—体外转录—gRNA纯化—显微注射—检测敲除效率—饲养至成鱼—与野生型交配—检测下一代胚胎是否携带突变位点—饲养成年后剪尾鉴定出杂合突变体—两杂合体交配得到纯合突变体的步骤。本发明首次利用CRISPR技术构建hoxa1a基因敲除斑马鱼突变体，其可作为动物模型用于研究hoxa1a基因在心脏发育过程中的作用以及为治疗Bosley‑Salih‑Alomainy综合征提供基础。
hoxa1a 基因斑马突变体构建方法应用

[发明专利]一种自发性肾阴虚Ptgds基因敲除大鼠模型的构建方法-CN202210191036.7在审
发明人：刘妍如;唐志书;宋忠兴 -专利权人：陕西中医药大学
申请日： 2022-02-25 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，涉及一种自发性肾阴虚Ptgds基因敲除大鼠模型的构建方法，包括以下步骤：1)设计靶序列Ptgds‑sgRNA1/2；2)纯化Cas9mRNA、Ptgds‑sgRNA1/2；3)利用CRISPR/Cas9系统，将Ptgds基因内的序列片段进行靶向敲除；4)将纯化的Cas9mRNA、Ptgds‑sgRNA1/2和Ptgds敲除基因注射到大鼠胚胎得到新生大鼠；5)鉴定选择出杂合子大鼠；6)进一步与野生大鼠进行多代繁殖得到Ptgds基因敲除大鼠模型。本发明具有基因修饰精确性高，靶向性特异、实验周期短的优点，开发出可靠且稳定的基因工程模型，为更年期综合征相关疾病的治疗作用奠定基础。
一种自发性阴虚 ptgds 基因大鼠模型构建方法

[发明专利]一种吗啉代寡核苷酸分子（VMO）有效转染鸡胚的方法-CN202111335855.6在审
发明人：俸艳萍;程羽;张桂欣;陈立根;黄黎明;麻燕明 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2021-11-08 - 公布日： 2022-05-10 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明公开了一种吗啉代寡核苷酸分子(VMO)有效转染鸡胚的方法，属于生物技术领域，具体步骤包括对孵化至第3天的胚蛋在无菌条件下进行赤道面开窗，选择存活状态良好的鸡胚；用显微注射仪的玻璃针将稀释的吗啉代寡核苷酸分子溶液(2μL，1μg/μL)注射到鸡胚卵黄囊血管；用医用胶带封口后放入孵化箱中继续孵化，观察胚胎存活率，并根据下一步要求进行转染效果检测。通过本发明建立了一种通过血管注射的方式成功地使吗啉代寡核苷酸分子在鸡胚体内发挥作用，可用于鸡胚外源基因敲低功能的研究。
一种吗啉代寡核苷酸分子 vmo 有效转染方法

[发明专利]一种斑马鱼NK/TCL肿瘤模型的构建方法及其应用-CN201810553147.1有效
发明人：赵维莅;熊杰;孙晓建;程澍 -专利权人：上海交通大学医学院附属瑞金医院
申请日： 2018-05-31 - 公布日： 2022-05-06 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明属于医学生物技术领域，具体涉及一种斑马鱼NK/TCL肿瘤模型的构建方法及其应用。本发明经过研究首次以斑马鱼作为模式生物成功构建了NK/TCL人源肿瘤异种移植模型。实验操作简便可行，实验周期短，消耗肿瘤细胞极少，可重复性高，可广泛应用于分子生物学研究及靶向药物筛选等多种领域。
一种斑马 nk tcl 肿瘤模型构建方法及其应用

[发明专利]一种非人哺乳动物人工辅助生殖方法-CN202111561190.0有效
发明人：丁方荣;王海平;王剑 -专利权人：北京亿里生物科技发展有限公司
申请日： 2021-12-20 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明提供了一种非人哺乳动物人工辅助生殖方法。本发明的方法包括以非人哺乳动物卵母细胞膜电位值X判定体外成熟非人哺乳动物卵母细胞质量。实验发现不同膜电位非人哺乳动物卵母细胞，其后续发育潜能具有显著性差异，因此推断，非人哺乳动物卵母细胞成熟后膜电位与非人哺乳动物卵母细胞成熟质量及后续发育潜能具有相关性，成熟后非人哺乳动物卵母细胞的膜电位可以作为非人哺乳动物卵母细胞成熟质量及后续发育潜能的一个重要判定指标。膜电位数值为负值，且在‑30～‑10 mV之间的牛卵母细胞，质量最好，后续受精发育和核移植胚胎发育率最高。
一种非人哺乳动物人工辅助生殖方法

[发明专利]一种灭活的仙台病毒低残留高效促融合方法-CN202111288816.5在审
发明人：吕祁峰 -专利权人：上海交通大学医学院附属第九人民医院
申请日： 2021-11-02 - 公布日： 2022-02-22 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明公开了一种灭活的仙台病毒低残留高效促融合方法，其中包括体外显微操作中将需融合的胞体在含灭活仙台病毒的培养液中的浸泡操作和将胞体与卵子胞膜接触的融合操作，其特征是所述浸泡操作，是用吸管吸住胞体，只吐露出胞体的一部分浸泡在灭活仙台病毒的培养液中，减少浸泡的胞膜面积；所述融合操作，是用吸管吸住胞体，只吐露出胞体的一部分压迫在所需融合的卵子胞膜上，并维持一定时间，待胞体膜与卵膜粘合较牢固后，再松开压迫，吐出胞体，撤走吸管。前一操作降低了灭活仙台病毒在核质置换中的残留，后一操作，既保证了前一操作中浸泡过灭活仙台病毒的胞膜面能精准成为融合面，又促进了胞体融合效率。
一种仙台病毒残留高效融合方法

[发明专利]一种降低残留线粒体的纺锤体核质置换方法-CN202111288906.4在审
发明人：吕祁峰;廖筱雨;李文治;谢雅婷;马猛;陈晨;赵磊文;司计强;林开波;匡延平 -专利权人：上海交通大学医学院附属第九人民医院
申请日： 2021-11-02 - 公布日： 2022-02-22 - 主分类号： C12N15/873 文献下载
摘要：本发明公开了一种降低残留线粒体的纺锤体核质置换方法。所述方法将取出的含纺锤体的胞体再次进行了去胞浆操作，使得纺锤体周围的胞浆几乎脱离，剩下的胞体几乎没有胞浆，呈现出胞膜几乎紧紧包裹纺锤体的现象，从而大幅度降低线粒体残留。在纺锤体核质置换中，采用本发明的方法可以将上述脱胞浆后含纺锤体的胞体在浸泡灭活仙台病毒溶液后再被压迫于受体卵子的膜上，促进纺锤体胞体的高效融合进入受体卵内。
一种降低残留线粒体纺锤体核质置换方法

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