[发明专利]固定化复合外肽酶蛋白质全水解及脱苦方法

权利要求书

1.一种固定化复合外肽酶蛋白质全水解及脱苦方法，其特征在于，所述方法包括：

1)新鲜牛或猪胰脏1Kg，加水4-10升，捣碎后在10-25℃下让其自溶8-24小时，自溶胰汁在3000-10000转/分下离心15-45分钟，收集上清液，过滤；滤液加硫酸铵至25-70％饱和度，收集沉淀，将沉淀溶于水，透析脱盐后得复合外肽酶溶液，

2)虾壳几丁质50-100g，加30-50％NaOH溶液200-600毫升，在30-70℃下脱乙酰基制成20-80％脱乙酰几丁质，再向上述脱乙酰几丁质中加入0.5-2％甲醛溶液，调节pH值至4-8，0-4℃下反应8-24小时；洗涤除去未反应的甲醛，加入100-300毫升，0.5-2％复合外肽酶溶液，0-4℃下让其反应8-24小时，然后除去未反应的复合外肽酶，制得固定化复合外肽酶，

3)配制酪蛋白溶液1-10％，调节pH值至6-8.5，用内肽酶或固定化内肽酶部分水解酪蛋白，制成酪蛋白部分水解物，也可以用上述内肽酶的混合物或固定化内肽酶混合物水解酪蛋白制备酪蛋白部分水解物，

4)用上述固定化复合外肽酶，在柱反应器或搅拌式反应器中进一步水解上述酪蛋白部分水解物，反应条件为pH5-8，温度30℃-60℃，可制得无苦味酪蛋白水解物，再用离子交换剂分离除去未完全水解的肽，制备出酪蛋白全水解物。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中步骤1)所述的复合外肽酶溶液也可以用新鲜牛或猪的肾脏替代胰脏来制备，用新鲜牛或猪的肾脏200g，加入1000毫升水捣碎后，在0-4℃下过滤，滤液加硫酸铵，收集30-80％饱和度之间所得的沉淀，所得沉淀溶于水，透析脱盐，得复合外肽酶溶液。

3.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中步骤1)所述的复合外肽酶溶液也可以用羧肽酶A、羧肽酶B、羧肽酶Y和亮氨酸氨肽酶按1∶0.5-1∶0.1-0.4∶0.4-0.8比例混合，再配成复合外肽酶溶液0.5-2％。

4.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中步骤2)所述的固定化复合外肽酶溶液也可以用以下部分脱乙酰几丁质方法制备；50-100g部分脱乙酰几丁质，加入100-300毫升复合外肽酶溶液0.5-2％，调节pH值至6-8，在0-4℃下放置8-24小时，再加入戊二醛至最后浓度为0.5-2％，在0-4℃下反应8-24小时，洗涤除去未反应的酶及戊二醛，制得固定化复合外肽酶。

5.根据权利要求1-4任一项的方法，其特征在于，可以用几丁质代替部分脱乙酰几丁质。

6.根据权利要求1-4任一项的方法，其特征在于，可以直接用完全脱除乙酰基后的几丁质，即甲壳素进行复合外肽酶的固定化用以制备固定化复合外肽酶。

7.根据权利要求1-4任一项的方法，其特征在于，可以用蟹壳几丁质代替虾壳几丁质。

8.根据权利要求1的方法，其特征在于，其中步骤3)也可以用大豆蛋白质制备蛋白质部分水解物。