[发明专利]一种阴道菌群分子分型试剂盒及其使用方法

说明书

本发明提供一种阴道细菌微生态分子分型试剂盒以及使用所述试剂盒进行非诊断目的的阴道细菌微生态分子分型的方法。在一些实施方案中，所述分子分型试剂盒可包含：扩增卷曲乳杆菌L.crispatus、詹氏乳杆菌L.jensenii、惰性乳酸杆菌L.iners、阴道加特纳菌G.vaginalis、阴道阿托波菌A.vaginae、伊格尔兹氏菌Eggerthella、巨球型菌Megasphaera、纤毛菌Leptotrichia/Sneathia、普雷沃氏菌Prevotella、all bacteria的引物序列、SYBR Green I，通过荧光定量PCR检测从而对阴道菌群进行准确的分子分型，进而增强女性生殖健康。

技术领域

本发明荧光定量PCR检测阴道微生物生态分子分型技术领域，具体涉及一种阴道细菌微生态分子分型试剂盒及其使用所述试剂盒进行非诊断目的的阴道细菌微生态分子分型的方法。

背景技术

正常微生物一般被定义用来形容定植在人体中的微生物群落，在宿主特定结构部位，并随宿主长期进化过程形成的，定植在宿主皮肤或是黏膜上的微生物群。体表、口腔、呼吸道、胃肠道、尿道及生殖道是正常成年人体中微生物分布的主要部位。经过与人体漫长的适应和生物进化过程，达到与人体共生的状态，并在两者间建立紧密的联系，对完善人体生理机能尤其是促进免疫功能的成熟发挥了关键的作用。局部的微生物群落在免疫调节中扮演重要的角色。

乳酸杆菌属(Lactobacillus genus)是常驻于女性阴道内的常驻菌,对维持女性生殖器官的正常环境具有重要作用。 就健康女性的阴道而言,乳酸不断产生以维持酸性(pH 值 4.5 至 5.5)环境,从而抑制其他机会性细菌的过度生长和由此引起的感染。高丰富度乳酸杆苗是女性生殖道健康的标识。在生理情况下，阴道菌群和宿主、环境之间构成相互制约、相互协调的动态平衡状态，共同建立以乳酸杆菌占绝对优势的育龄期阴道微生态环境。乳酸杆菌通过各种机制抵御外来致病菌的侵袭，包括：分解位于阴道内皮细胞的糖原，生成乳酸，维持阴道内低pH(3.8-4.4)；产生生物表面活性剂抵制外来致病菌的入侵，维持乳酸抒苗的绝对优势地位；产生抗生素、过氧化氢等抑菌杀菌物质；乳酸杆菌粘附阴道胞内皮细表面，形成紧密连接，形成机械屏障，阻止外来侵入菌进入血液循环；乳酸杆菌与阴道内皮细胞受体结合，竞争营养和空间等机制，促进和维持女性生殖健康等。

但由于受环境变化、药物刺激及宿主自身激素水平和免疫力改变等因素影响，阴道内的微生态菌群多样性可发生变化，阴道乳杆菌减少，阴道pH值升高，各种有害菌大量增殖，打破和改变宿主阴道内的微生态平衡,其由生理性组合状态转变为病理性组合状态，从而引起女性生殖道微生态失衡，进而导致阴道炎甚至宫颈癌等疾病的发生。细菌性阴道炎（bacterial vaginosis，BV）作为以阴道菌群改变为特征的常见妇科病影响着10%-37%的女性。BV的存在大大增加了早产、流产、胎膜早破等不良妊娠危险性,并且BV相关菌群能显著提高女性患盆腔炎症的几率。这种现象可能是由于女性的年龄、压力、荷尔蒙失调、月经以及通过性交产生的机会性细菌造成的。阴道炎是很多女性都会经历的一种常见病，但如果长期置之不理，则有增加盆腔炎的风险，并因阴道炎引起术后感染，可引起很多并发症。

引起阴道炎的主要微生物包括阴道加特纳菌和白念珠菌,以及普雷沃氏菌属、厌氧革兰氏阳性球菌和移动弧菌 (Mobiluncus spp.)、解脲脲原体和人型支原体。即引起阴道炎的微生物种类繁多,可能由一种或几种微生物引起炎症。

宫颈癌是女性第四大常见癌症之一，每年约有 57 万例新发病例和 31 万例死亡病例，全球宫颈癌的年龄标准化发病率为 13.1/10 万妇女。在中国的 15-44 岁女性中，宫颈癌已成为第二大常见癌症和第三大癌症死亡原因。共生在宿主阴道中的细菌通过影响宫颈癌关键致病因子--HPV的感染与清除，参与了宫颈疾病的发生、发展过程。已有的研究表明细菌性阴道炎通过影响生殖道环境的pH值、免疫学反应、生殖道损伤等促进HPV感染，并且抑制HPV的清除；益生菌处理可能通过矫正阴道细菌微生态抑制HPV的感染。