[发明专利]一种编码右旋糖酐蔗糖酶的基因及其应用在审
| 申请号： | 202310634520.7 | 申请日： | 2023-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN116622747A | 公开（公告）日： | 2023-08-22 |
| 发明（设计）人： | 韦旭钦;陈发忠;陈欣怡;周志强;韦志明;邓慧连;陆江南;戴洪明;韦文孟;苏照环;许司粲;吴睿;阮恒;李广;曹志强;王则奋;吴建璋 | 申请（专利权）人： | 广西产研院生物制造技术研究所有限公司;广西产研院生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N9/10;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/02;C12P19/18;C12P19/00;C12P19/08;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南宁胜荣专利代理事务所(特殊普通合伙) 45126 | 代理人： | 关文龙 |
| 地址： | 530000 广西壮族自治区南宁市中国（广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 编码 右旋糖酐 蔗糖 基因 及其 应用 | ||
1.一种编码右旋糖酐蔗糖酶的基因，其特征在于，所述基因为基因dsrA，包括SEQ IDNO.1核苷酸序列序列。
2.根据权利要求1所述的编码右旋糖酐蔗糖酶的基因，其特征在于，所述基因所编码的蛋白质，包括SEQ ID NO.2氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的编码右旋糖酐蔗糖酶的基因，其特征在于，所述基因来源于肠膜状明串珠菌的右旋糖酐蔗糖酶基因，是通过设计引物从肠膜状明串珠菌基因组中克隆得到的右旋糖酐蔗糖酶基因。
4.根据权利要求3所述的编码右旋糖酐蔗糖酶的基因，其特征在于，通过对肠膜状明串珠菌进行非产酶条件的培养，培养基成分及培养条件：即LB液体培养基添加终浓度为1～2.0％(W/V)的蔗糖，于30℃，转速为200rpm的摇床培养30h，并提取其基因组DNA为模板，设计引物对右旋糖酐蔗糖酶基因进行PCR扩增，引物序列如下：
引物1序列：5’-CAG
引物2序列：5’-ATA
引物1序列的下划线为NdeI酶切位点，引物2序列下划线为XhoI酶切位点。
5.根据权利要求4所述的编码右旋糖酐蔗糖酶的基因，其特征在于，25μL的PCR反应体系：5×PSPCR缓冲液5μL，dNTP200μmol/L，引物各10pmol/L，基因组DNA模板100ng，PrimeSTARHSDNA聚合酶0.5个单位，加超纯水至反应总体积为25.0μL。
6.根据权利要求4所述的编码右旋糖酐蔗糖酶的基因，其特征在于，PCR扩增程序如下：95℃3min；95℃30sec；58.5℃30sec；延伸温度和时间72℃4.5min；循环34次；72℃10min。
7.根据权利要求6所述的编码右旋糖酐蔗糖酶的基因，其特征在于，采用PCR扩增程序获得PCR产物用试剂盒进行纯化后，再分别用NdeI和XhoI内切酶进行酶切，将此DNA片段连接到表达载体pET-22b(+)的NdeI和XhoI酶切位点处，得到重组表达载体pET-22b-dsrA，转化到大肠杆菌宿主菌E.coliXL-1Blue进行克隆筛选和全基因测序分析，最终将序列正确的表达质粒pET-22b-dsrA转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中得到重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/pET-22b-dsrA。
8.一种表达载体，其特征在于，它含有权利要求1～7任一项所述的基因。
9.一种宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求3所述表达载体转化的原核细胞或真核细胞。
10.一种根据权利要求2～7任一项所述的编码右旋糖酐蔗糖酶的基因的应用，其特征在于，所述的蛋白质在转化蔗糖制备右旋糖酐、低聚糖或果糖中的应用。
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