[发明专利]tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用

说明书

本发明公开了tRF‑19‑DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，所述tRF‑19‑DRMD5112的具体序列为：5’‑AATCCCGGACGAGCCCCCA‑3’。所述诊断试剂盒是以tRF‑19‑DRMD5112这一小RNA作为标志物对其在血浆中的表达量进行检测，对肾细胞癌进行早期诊断。本发明提供了tRF‑19‑DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，通过对tRF‑19‑DRMD5112这一小RNA在血浆中的表达量进行检测实现了肾细胞癌的早期诊断。检测方法操作简单，周期短，灵敏度高，易于临床推广。

技术领域

本发明涉及医学生物检测技术领域，具体涉及tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用。

背景技术

肾癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，约占所有癌症的3％，2020年全球新增病例超过40万例。肾癌中，约90％为肾细胞癌(RCC)，其中肾透明细胞癌(ccRCC)的占比约为75％。得益于靶向治疗的开展，RCC治疗已取得了巨大的进步，但RCC仍然是最致命的泌尿生殖系统癌症，5年生存率约为76％。然而，生存率统计数据高度依赖于诊断的初始阶段，局部RCC患者的5年生存率为93％，而远处转移患者的5年生存率仅为15.3％，转移性ccRCC患者的5年生存率仅为12％。目前，大约30％的RCC患者初诊为晚期或转移性肾癌，提高RCC早期检测率有望大大降低癌症相关死亡率。

早期肾癌多无临床症状，晚期肾癌可出现血尿、腰痛、腹部肿块“肾癌三联症”，但仅占6％～10％。无症状肾癌的发现率逐年升高，目前约占60％。肾癌的诊断包括临床诊断和病理诊断。临床诊断主要依靠影像学检查，通过超声、CT、MRI等将肾脏肿块划分为囊性和实性肿块。其中，CT检查被认为是肾癌诊断的金标准，准确率高于超声且相对MRI更简单便捷。CT检查的局限性是费用相对超声检查高、且具有电离辐射、造影剂可能导致过敏及肾毒性等。肾癌确诊依靠病理学检查，通过术后组织学确定的侵袭范围进行病理分期pTNM诊断。目前，RCC尚缺乏非侵入的早期诊断方式。

近年来，有研究者鉴定出一些基因突变、基因表达和蛋白质特征用于RCC的早期诊断。ccRCC中最常见的基因突变有VHL(45.8％)、PBRM1(32.6％)、SETD2(11.7％)和BAP1(9.1％)等，由染色体3p缺失所致。除了染色体畸变，启动子CpG超甲基化、错义和截短突变也在ccRCC DNA失调中占很大比例。从基因表达特征角度，Ujfaludi等人分析了关键ccRCC驱动基因VHL、SETD2、PBRM1和BAP1的转录组特征，发现这些基因的中位转录可以区分ccRCC与正常组织，敏感度和特异性分别为87％和77％。蛋白质特征角度的研究发现，可能用于诊断ccRCC的蛋白特征与蛋白质折叠和结合、细胞信号通路调控、微管蛋白形成和热休克蛋白反应相关，如Yang等通过高效液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)发现血浆RBP6、TUBB或ZFP3肽段可用于诊断ccRCC(AUC＝0.81～0.82)，Benjamin等提出CFL1、PFN1、NNMT和ALDOA这4种蛋白质可作为诊断ccRCC的候选标志物(AUC0.7)，Zhang等通过定量蛋白组学分析和ELISA验证，鉴定出HSC71是区分RCC和良性泌尿系统疾病的潜在血清生物标志物(AUC＝0.86)，Papale等借助表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)成功区分ccRCC患者和健康人(AUC＝0.93)，并鉴定RKIP为最重要的ccRCC患者尿液生物标志物。