[发明专利]tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用

权利要求书

1.tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述tRF-19-DRMD5112的具体序列为：5’-AATCCCGGACGAGCCCCCA-3’。

2.根据权利要求1所述的tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述诊断试剂盒是以tRF-19-DRMD5112这一小RNA作为标志物对其在血浆中的表达量进行检测，对肾细胞癌进行早期诊断。

3.根据权利要求2所述的tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述诊断试剂盒包括以下组分：针对tRF-19-DRMD5112的逆转录引物、针对tRF-19-DRMD5112的上游引物、针对U6的逆转录引物、针对U6的上游引物、通用引物、5×逆转录缓冲液、逆转录酶混合液和SYBR Green qPCR混合液。

4.根据权利要求3所述的tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，针对tRF-19-DRMD5112的逆转录引物的序列为：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTGGGGG。

5.根据权利要求3或4所述的tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，针对tRF-19-DRMD5112的上游引物的序列为：

CGCGAATCCCGGACGAG。

6.根据权利要求5所述的tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，针对U6的逆转录引物的序列为：

CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGAACGCTTC。

7.根据权利要求6所述的tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，针对U6的上游引物的序列为：

ACACTCCAGCTGGGACGCAAATTCGTGAAG。

8.根据权利要求7所述的tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，通用引物的序列为：

AGTGCAGGGTCCGAGGTATT。

9.根据权利要求8所述的tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，5×逆转录缓冲液和逆转录酶混合液来源于TAKARA的逆转录试剂盒(No.RR037A)；SYBR Green qPCR混合液来源于南京诺唯赞生物科技股份有限公司的ChamQ SYBR qPCRMaster Mix试剂盒(No.Q711-02)。

10.根据权利要求9所述的tRF-19-DRMD5112在制备肾细胞癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于，检测tRF-19-DRMD5112这一小RNA作为标志物在血浆中的表达量的方法，包括以下步骤：

步骤1：采集血液样本，离心获得血浆；

步骤2：通过酚-氯仿法提取血浆中的总RNA；

步骤3：使用TAKARA的逆转录试剂盒(No.RR037A)以及针对tRF-19-DRMD5112和U6的两种逆转录引物进行逆转录反应，分别获得tRF-19-DRMD5112和U6的cDNA；

步骤4：使用南京诺唯赞生物科技股份有限公司的ChamQ SYBR qPCR Master Mix试剂盒(No.Q711-02)以及针对tRF-19-DRMD5112和U6的两种上游引物和通用引物进行实时定量PCR反应，并通过荧光实时定量PCR技术分别检测各样本中tRF-19-DRMD5112和U6的表达丰度值，即Ct值；

步骤5：以U6为对照，计算ΔCt＝Ct_{tRF-19-DRMD5112}-Ct_U6；则血浆中tRF-19-DRMD5112的相对表达量为2^-ΔCt。