[发明专利]一种RNA保存液及其制备方法

说明书

本发明提供了一种RNA保存液，涉及生物医学技术领域，包括，该保存液按照组分终浓度计量，包括以下组分：二硫苏糖醇：2mM‑10mM；柠檬酸盐：1mM‑3mM；硫酸铵：10‑19mM；黄原酸酯：0.1‑0.6g/L；以及其余为无菌无酶的去离子水/DEPC水。本发明一种RNA保存液提高了RNA样品的稳定性，降低了RNA样品的降解率，避免了RNA样品变性，相比于现有RNA保护剂的毒性更小，并且不会干扰RNA样品参与下游实验，实验操作以及制备方法简单，降低了RNA样品保存的成本。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体而言，涉及一种RNA保存液及其制备方法。

背景技术

现有保存RNA样品的技术主要存在以下问题：其一，液氮或超低温冰箱保存RNA，若操作不当会导致液氮外贱对实验人员造成伤害；保存一段时间后RNA样品会明显被降解；其二，乙醇沉淀RNA法，在使用RNA之前均需要离心、洗涤和溶解，实验操作不仅费事费力，而且不利于RNA的反复使用；其三，添加甲酰胺的RNA保护液，虽然在一定程度上能抑制RNase，但也会引起RNA变性及影响后续反应效率。此外，在使用RNA样品之前还需要去除甲酰胺，对RNA的反复使用有限制作用。其四，部分RNA保护剂中添加EDTA，可螯合RNase发挥作用所需的阳离子，对RNase有一定抑制作用，但EDTA是一种有毒物质，不利于实验室安全，并且EDTA干扰RNA参与下游实验。其五，由于大部分RNA保护液产品的成分种类较多导致其成本较高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种RNA保存液，以改善上述问题。为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

本申请提供了一种RNA保存液，该保存液按照组分终浓度计量，包括以下组分：

二硫苏糖醇：2mM-10mM；

柠檬酸盐：1mM-3mM；

硫酸铵：10-19mM；

黄原酸酯：0.1-0.6g/L；以及

其余为无菌无酶的去离子水/DEPC水。

进一步地，所述二硫苏糖醇的终浓度为6mM-10mM，所述柠檬酸盐的终浓度为1.5mM-2mM，所述硫酸铵的终浓度为10-16mM，所述黄原酸酯的终浓度为0.2-0.5g/L。

进一步地，所述二硫苏糖醇的终浓度为8mM，所述柠檬酸盐的终浓度为2mM，所述硫酸铵的终浓度为13mM，所述黄原酸酯的终浓度为0.4g/L。

进一步地，该保存液的pH为4.5-7.5。

进一步地，该保存液的pH为4.5-6.5。

本发明还提供了一种用于制备所述RNA保存液的制备方法，包括以下步骤：

(1)依次向无菌无酶的离心管中分别加入二硫苏糖醇溶液和柠檬酸盐缓冲溶液；

(2)再依次向所述离心管中加入硫酸铵溶液和黄原酸酯溶液；

(3)最后向所述离心管中加入无菌无酶的去离子水/DEPC水，充分溶解后，使得二硫苏糖醇的终浓度为2mM-10mM，柠檬酸盐的终浓度为1mM-3mM，硫酸铵的终浓度为10-19mM，黄原酸酯的终浓度为0.1-0.6g/L，得到RNA保存液。

进一步地，还包括步骤(4)：对步骤(3)所得RNA保存液进行微滤。

进一步地，所述步骤(4)具体包括以下步骤：

(4-1)将步骤(3)离心管中的溶液先通过孔径为0.22μm的微滤膜进行过滤，得到第一滤液；

(4-2)将所述第一滤液通过孔径为0.1μm的微滤膜进行过滤，得到第二滤液；