[发明专利]一种黄酮醇类化合物八角莲酮A-F的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种黄酮醇类化合物八角莲酮A-F，是从八角莲中提取的八角莲酮A(dysosmaflavonoid A)、八角莲酮B(dysosmaflavonoid B)、八角莲酮C(dysosmaflavonoidC)、八角莲酮D(dysosmaflavonoid D)、八角莲酮E(dysosmaflavonoid E)、八角莲酮F(dysosmaflavonoid F)，分子结构式分别为：

2.权利要求1所述的黄酮醇类化合物八角莲酮A-F的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以八角莲药材20-40kg为原料，每次加入3–5倍原料重量体积、体积浓度为95％的乙醇加热回流提取3次，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，提取温度为92–95℃，每次提取时间为1–1.5小时，减压回收95％乙醇，得浸膏状95％乙醇提取物；药渣再加入3–5倍原料重量体积、体积浓度为50％的乙醇加热回流提取1次，提取温度为92–95℃，提取时间为1–1.5小时，减压回收50％乙醇，得浸膏状50％乙醇提取物；合并95％乙醇提取物和50％乙醇提取物，加入体积为提取物重量2倍量的无水乙醇溶解，再加入重量为提取物2倍量的硅藻土吸附，回收溶剂后，依次加入体积为提取物3倍量的二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇洗脱，回收溶剂，分别得二氯甲烷洗脱部位、乙酸乙酯洗脱部位、甲醇洗脱部位；将甲醇洗脱部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:1、100:3、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、0:100的二氯甲烷-甲醇混合溶剂系统进行梯度洗脱，每一梯度用30L–60L洗脱液，流速为50–70mL/min，每5L–10L为一流份，收集54个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF₂₅₄薄层板，分别以体积比4:5的石油醚-丙酮和体积比5:2的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以体积比10:90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105℃加热3–5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1–12、流份13–24、流份25–30、流份31–36、流份37–38、流份39–42、流份43–44、流份45–48、流份49–54，得到组份Fr.M1、组份Fr.M2、组份Fr.M3、组份Fr.M4、组份Fr.M5、组份Fr.M6、组份Fr.M7、组份Fr.M8、组份Fr.M9；

组分Fr.M4经sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，以5.0L–10L甲醇洗脱，流速为5–10mL/min，每100mL–200mL为一流份，收集50个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，分别合并流份1–25、流份26–44、流份45–50，得到亚组份Fr.M4–1、亚组份Fr.M4–2、亚组分Fr.M4–3；亚组分Fr.M4–1经ODS柱色谱分离，以体积比10:90、30:70、50:50、70:30、90:10、100:0的MeOH–H₂O混合溶剂系统梯度洗脱，每一梯度为2.5L–5L，每一梯度为一亚组分，共得到亚组份Fr.M4–1–1、亚组份Fr.M4–1–2、亚组份Fr.M4–1–3、亚组份Fr.M4–1–4、亚组份Fr.M4–1–5、亚组份Fr.M4–1–6；亚组份Fr.M4–1–2经sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，以500–1000mL甲醇洗脱，流速为2.5–5mL/min，每5mL–10mL为一流份，收集100个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，分别合并流份1–17、流份18–41、流份42–59、流份60–77、流份78–92、流份93–100，收集得到亚组份Fr.M4–1–2–1、亚组份Fr.M4–1–2–2、亚组份Fr.M4–1–2–3、亚组份Fr.M4–1–2–4、亚组份Fr.M4–1–2–5、亚组份Fr.M4–1–2–6；亚组分M4–1–2–3经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为52:48的甲醇-水混合溶剂洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为3mL/min，分别收集保留时间为7.9min、8.3min、10.8min、12.8min、16.4min、25.1min的色谱峰，得到亚组份Fr.M4–1–2–3–1、亚组份Fr.M4–1–2–3–2、亚组份Fr.M4–1–2–3–3、亚组份Fr.M4–1–2–3–4、亚组份Fr.M4–1–2–3–5、亚组分Fr.M4–1–2–3–6；亚组份Fr.M4–1–2–3–3经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为27:73的乙腈-水混合溶剂洗脱，色谱柱为YMC-PackODS-A，流速为3mL/min，分别收集保留时间为17.5min的色谱峰，得到八角莲酮E；

亚组份Fr.M4–1–2–3–4经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为27:73的乙腈-水混合溶剂洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为3mL/min，收集保留时间为30.7min的色谱峰，得到八角莲酮F；

组份Fr.M5经sephadex LH-20柱色谱分离，2.5L–5L甲醇洗脱，流速为5–10mL/min，每100mL–200mL为一流份，收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，分别合并流份1–3、流份4–5、流份6–7、流份8–10、流份11–13、流份14–17、流份19–21、流份22–25，得到亚组份Fr.M5–1、亚组份Fr.M5–2、亚组份Fr.M5–3、亚组份Fr.M5–4、亚组份Fr.M5–5、亚组份Fr.M5–6、亚组份Fr.M5–7、亚组分Fr.M5–8；亚组份Fr.M5–1～Fr.M5–5合并，经MCI柱色谱分离，经体积比0:100、10:90、30:70、50:50、70:30、90:10、100:0的MeOH–H₂O混合溶剂系统梯度洗脱，每一梯度洗脱溶剂为1.0L–2.0L，流速为2.5–5.0mL/min，每250mL–500mL为一流份，收集28个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，分别合并流份1–5、流份6–15、流份16–23、流份17–28，得到亚组分Fr.M5–1–1、亚组分Fr.M5–1–2、亚组分Fr.M5–1–3、亚组分Fr.M5–1–4；亚组分Fr.M5–1–3经硅胶柱色谱分离，以体积比100:0、100:1、100:3、100:5、100:7、100:10、7:1、3:1的CHCl₃-MeOH混合溶剂系统梯度洗脱，每一梯度洗脱溶剂为50mL–100mL，流速为2.0–5.0mL/min，每5mL–10mL为一流份，收集80个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，分别合并流份1–10、流份11–20、流份21–30、流份31–40、流份41–46、流份47–51、流份52–60、流份61–70、流份71–80，得到亚组份Fr.M5–1–3–1、亚组份Fr.M5–1–3–2、亚组份Fr.M5–1–3–3、亚组份Fr.M5–1–3–4、亚组份Fr.M5–1–3–5、亚组份Fr.M5–1–3–6、亚组份Fr.M5–1–3–7、亚组份Fr.M5–1–3–8、亚组分Fr.M5–1–3–9；亚组分Fr.M5–1–3–5经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为55:45的甲醇-水混合溶剂洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为3mL/min，收集保留时间为34.9min的色谱峰，得到八角莲酮A；

组分Fr.M6经sephadex LH-20柱色谱分离，15L–30L甲醇洗脱，流速为5–10mL/min，每0.5L–1L为一流份，收集30个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，分别合并流份1–18、流份19–30，得到亚组份Fr.M6–1和Fr.M6–2；亚组份Fr.M6–1经ODS柱色谱分离，以体积比为10:90、30:70、50:50、70:30、90:10、100:0的MeOH-H₂O混合溶剂系统梯度洗脱，每一梯度洗脱溶剂为2.5L–5L，流速为3.0–6.0mL/min，每0.5L–1L为一流份，收集30个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，分别合并流份1–5、流份6–10、流份11–20、流份21–30，得到亚组分Fr.M6–1–1、亚组分Fr.M6–1–2、亚组分Fr.M6–1–3、亚组分M6–1–4；亚组分Fr.M6–1–3经硅胶柱色谱分离，以体积比100:0、100:1、100:3、100:5、100:7、100:10、100:30的二氯甲烷-甲醇混合溶剂系统梯度洗脱，每一梯度洗脱溶剂为125L–250L，流速为1.0–2.0mL/min，每一洗脱梯度为一流份，得到亚组分Fr.M6–1–3–1、亚组分Fr.M6–1–3–2、亚组分Fr.M6–1–3–3、亚组分Fr.M6–1–3–4、亚组分Fr.M6–1–3–5、亚组分Fr.M6–1–3–6、亚组分Fr.M6–1–3–7；亚组份Fr.M6–1–3–4经sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，125mL–250mL甲醇洗脱，流速为1–2mL/min，每5mL–10mL为一流份，收集25个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，分别合并流份1–7、流份8–16、流份17–25，得到亚组分Fr.M6–1–3–4–1、亚组分Fr.M6–1–3–4–2、亚组分Fr.M6–1–3–4–3；亚组分Fr.M6–1–3–4–2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为50:50的甲醇-水混合溶剂洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为3mL/min，分别收集保留时间为33.1min、41.5min、45.0min的色谱峰，得到亚组分Fr.M6–1–3–4–2–1、亚组分Fr.M6–1–3–4–2–2、亚组分Fr.M6–1–3–4–2–3；亚组分Fr.M6–1–3–4–2–1经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为35:65的乙腈-水混合溶剂洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为3mL/min，收集保留时间为11.9min的色谱峰，得到化合物八角莲酮C；

亚组分Fr.M6–1–3–4–2–2经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为30:70的乙腈-水混合溶剂洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为3mL/min，收集保留时间为15.6min的色谱峰，得到化合物八角莲酮D；

亚组分Fr.M6–1–3–4–2–3经制备型高效液相色谱纯化，以体积比为30:70的乙腈-水混合溶剂洗脱，色谱柱为YMC-Pack ODS-A，流速为3mL/min，收集保留时间为28.5min的色谱峰，得到化合物八角莲酮B。