[发明专利]一种鉴别当归及人参健脾丸中是否混有欧当归的特异性引物、探针和方法在审
申请号: | 202211087520.1 | 申请日: | 2022-09-07 |
公开(公告)号: | CN115896325A | 公开(公告)日: | 2023-04-04 |
发明(设计)人: | 栾永福;林永强;解盈盈;汪冰;周广涛;周倩倩;穆向荣 | 申请(专利权)人: | 山东省食品药品检验研究院 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
代理公司: | 北京元本知识产权代理事务所(普通合伙) 11308 | 代理人: | 徐苹 |
地址: | 250101 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 鉴别 当归 人参 健脾丸中 是否 混有欧 特异性 引物 探针 方法 | ||
1.一种鉴别当归及人参健脾丸中是否混有欧当归的特异性引物,其特征在于,所述特异性引物包括上游引物和下游引物,所述上游引物的核苷酸序列为5'-CATCCCGTTAGTGGGTAGC-3',所述下游引物的核苷酸序列为5'-CCTAGTGGCTTCGGGCG-3'。
2.一种鉴别当归及人参健脾丸中是否混有欧当归的探针,其特征在于,所述探针5'端标记荧光素基团FAM,3'端标记淬灭基团BHQ1,所述探针的核苷酸序列为FAM-TAGCGGCGTCATTCCAAAATACAAC-BHQ1'。
3.一种鉴别当归及人参健脾丸中是否混有欧当归的方法,其特征在于,所述方法利用权利要求1所述的特异性引物和权利要求2所述的探针进行当归和欧当归的鉴别。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述方法包括:
结合权利要求1所述的特异性引物和权利要求2所述的探针进行实时荧光PCR反应,检测或辅助检测待测样品中是否含有或候选含有欧当归;
结合权利要求1所述的特异性引物和权利要求2所述的探针进行实时荧光PCR反应,检测或辅助检测待测样品是否为或候选为欧当归。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述方法的主要步骤包括:
(1)提取待测样品的总DNA;
(2)以提取的DNA为模板,配制PCR反应体系,所述PCR反应体系中包括权利要求1所述的上游引物、下游引物和权利要求2所述的探针,设置反应条件,将PCR反应体系置于荧光定量PCR仪中进行反应;
(3)根据反应结果进行特异性鉴别。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述PCR反应体系为:总体积为20μl,分别加入荧光PCR反应混合液(2×)10μl,权利要求2所述的探针(2μmol/L)1μl,权利要求1所述的上下游引物(5μmol/L)各1μL,模板DNA溶液0.5μl,灭菌超纯水6.5μl。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述PCR反应条件为:将反应体系置于荧光定量PCR仪中进行反应,设定如下参数:阶段1:95℃,3分钟;阶段2:95℃,10秒,65℃,32秒,35个循环。
8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤(3)所述根据反应结果进行特异性鉴别,以是否产生S型荧光扩增曲线为判定依据;
人参健脾丸阳性样品:按处方量及工艺用同等比例的欧当归药味代替当归药味;
结果判定包括:
(1)无荧光对数增长,或有荧光对数增长但相应的CT值>30.0,视为未检出欧当归;
(2)有荧光对数增长,且相应的CT值<30.0,视为检出欧当归。
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