[发明专利]一种具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法及用途

权利要求书

1.一种具有雪茄风味的烤烟提取物用于烟草加香的用途，其特征在于，所述具有雪茄风味的烤烟提取物的制备方法包括如下步骤：

（1）选取堆积发酵过程中变色阶段的雪茄原料，高压粉碎然后称取雪茄烟末样品放入盛有无菌生理盐水中，混合摇匀，制备出雪茄烟末悬液；然后稀释制成涂布液；

（2）用牛肉膏蛋白胨培养基进行雪茄烟叶表面微生物的筛选，雪茄烟叶表面微生物的筛选步骤为：将牛肉膏蛋白胨培养基制成无菌平板，待充分冷却凝固后，取步骤（1）的涂布液涂在平板表面，使菌液均匀分散在整个平板表面，在37±3℃下培养48-72h，根据培养后的菌落形态，接种环将菌株划线至LB固体培养基中进行纯化分离，得到雪茄烟叶表面优势微生物；

（3）将步骤（2）得到的雪茄烟叶表面优势微生物点接至雪茄烟叶培养基中，在一定温度下培养一段时间；其中，雪茄烟叶培养基组成为：烟叶粉末10g和琼脂8g，将其在沸水中煮20min，在自然pH值下115 ℃高压灭菌 30 min，得到雪茄烟叶培养基；

（4）将步骤（3）得到的菌落稀释后得到雪茄菌液；

（5）将步骤（4）得到的雪茄菌液喷洒于烤烟烟叶上，在一定环境下发酵一段时间；雪茄菌液与烤烟烟叶的比例为1ml菌液洒于1kg烤烟烟叶上；发酵条件为在40℃环境中发酵15天；

（6）将发酵后的烤烟烟叶粉碎后在80-100℃下灭菌处理，然后加入水，混合均匀，在密封、37±3℃、pH值7.0±0.5、微氧条件下发酵30d，将发酵液在60-80℃下灭酶，然后使用第一溶剂80wt%酒精溶液提取三次以上，将提取液混合过滤后真空减压浓缩；

（7）将步骤（6）得到浓缩物冷却静置一段时间后，再用第二溶剂混合溶解，过滤后滤液再真空减压浓缩至浓缩物相对密度为1.3000±0.008、折光指数为1.4000±0.008结束，得到烤烟浸膏；即为具有雪茄风味的烤烟提取物；所述第二溶剂为95wt%的酒精溶液。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤（1）的生理盐水为0.85wt%；涂布液为梯度稀释获得，浓度为原雪茄烟末悬液的1.0、10^-1、10^-2、10^-3和10^-4。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤（4）菌落稀释采用0.85wt%的无菌生理盐水；稀释倍数为100倍。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，将所述具有雪茄风味的烤烟提取物用75wt%酒精稀释后得到的稀释液喷洒到烟丝上。