[发明专利]一种皱纹盘鲍、绿鲍及二者杂交子代的分子鉴定方法

说明书

本发明公开了一种皱纹盘鲍、绿鲍及二者杂交子代的分子鉴定方法，属于生物技术领域。本发明以皱纹盘鲍、绿鲍及二者的杂交子代作为研究对象，在当前主养鲍中筛选设计了NRBP‑L基因片段作为分子标记，应用所扩NRBP‑L基因片段在皱纹盘鲍和绿鲍中的长度差异，成功鉴定了皱纹盘鲍、绿鲍及其杂交子代。采用本发明的方法鉴定皱纹盘鲍、绿鲍及其杂交子代，具有实验快捷，操作简便，鉴定直观，无需测序的优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种皱纹盘鲍、绿鲍及二者杂交子代的NRBP-L分子鉴定方法。

背景技术

皱纹盘鲍（ Haliotis discus hanni）和绿鲍（ H. flugens）均属于软体动物门（Mollusca）、腹足纲（Gastropoda）、原始腹足目（Vetigastropoda）、鲍科（Haliotidae）、鲍属（ Haliotis），因肉质鲜美、营养丰富、野生捕获不易，又符合高蛋白、低脂肪的健康饮食要求，被誉为海产八珍之首，素有“软黄金”之称，广受消费者喜爱。但是野生鲍的储量远不能满足市场需求，因此鲍的人工养殖业得以迅速发展。据2022年中国渔业统计年鉴显示，2021年福建鲍产量超17万吨，居全国首位，年产值达200多亿元，为省产值最高的海水养殖产业。皱纹盘鲍是我国最广泛养殖的品种，自然分布于我国山东和辽东半岛等，原本是温带种，后从黄、渤海移到亚热带的福建海域养殖，已在南方历经近二十年的温度驯化。绿鲍是原产自加利福尼亚、墨西哥沿岸的暖水种、大型鲍，在引入中国后表现出优异的温度耐受性。当前以国内皱纹盘鲍为母本、墨西哥西岸绿鲍为父本，通过人工繁育可获得优良的杂交种，在生长速率、耐髙温能力和度夏存活率上表现出明显的杂种优势。鉴于当前苗种市场混杂、行业缺乏自律，存在不良育苗商以次充好、掺杂假苗等乱象，不利于优势杂交鲍新品种的规模化繁育及养殖示范。故当前亟需开发皱纹盘鲍、绿鲍及其杂交子代的分子标记及开展鉴定技术研究。

随着分子生物学技术的发展，目前已有多种类型的分子标记被开发应用，包括万俊芬等（2003）应用开发的扩增片段长度多态性（AFLP）标记研究和鉴别皱纹盘鲍和日本盘鲍两个亚种间的遗传关系（鲍与扇贝遗传育种中的分子标记研究，学位论文），Cruz等（2005）开发了绿鲍的微卫星（SSR）标记并应用于红鲍、粉鲍的跨种研究（DOI：10.1111/j.1471-8286.2005.01088.x），Sekino等（2006）开发了75个微卫星（SSR）标记用于皱纹盘鲍研究（DOI：10.1007/s10126-005-6179-6），亓海刚等（2009）利用皱纹盘鲍的表达序列标签（EST）序列获得了302个单核苷酸多态性（SNP）标记用于皱纹盘鲍种质研究（皱纹盘鲍基因组单核苷酸多态性标记的开发与应用，学位论文），Supernault等（2010）应用识别蛋白、精子溶解蛋白和卵黄受体等分子标记尤其是内含子的长度差异鉴别了7种北美鲍（DOI：10.1007/s10592-009-9925-x），游伟伟等（2015）设计afa142等3个种特异性基因位点完成了绿鲍、皱纹盘鲍及二者正反交子代的2步PCR鉴别分析（DOI：10.1016/j.aquaculture.2015.05.043），Lee等（2017）应用逆转录转座子相关特征序列扩增位点（SCARs）鉴别了鲍属包括皱纹盘鲍的5种鲍（DOI：10.1007/s13258-017-0619-3），张仪方等（2019）应用24对微卫星标记研究了皱纹盘鲍、绿鲍及二者的正反杂交子代和回交子代（鲍的种间及群体间形态差异和遗传多样性研究）等。然而以上种质鉴定鉴别方法涉及分子标记的研发，并进行数个到数十个位点的大量扩增并琼脂糖电泳检测，虽然准确性和重复性较好，但在实际应用中需要用到较多实验设备，且较为耗时耗力，在进一步推广中存在一定缺陷。因此需要开发快速简便的分子标记，尤其适用于大量苗种的群体的快速鉴别，以规范苗种市场，助力养殖实践，推动我国鲍产业的进一步高质量发展。

发明内容