[发明专利]一种皱纹盘鲍、绿鲍及二者杂交子代的分子鉴定方法

权利要求书

1.一种皱纹盘鲍、绿鲍及二者杂交子代的分子鉴定试剂盒，其特征在于：包括种质鉴定引物对NRBP-L-F和NRBP-L-R，所述引物对NRBP-L-F和NRBP-L-R如下：

NRBP-L-F：5’- CGCATGGCTCTTTATAGGCGGA-3’

NRBP-L-R：5’- GCACCAAGTTTATGTTGACAATTTCCC-3’。

2.权利要求1所述的分子鉴定试剂盒在鉴定皱纹盘鲍、绿鲍及二者杂交子代中应用。

3.一种皱纹盘鲍、绿鲍及二者杂交子代的分子鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1，提取待鉴定鲍的基因组DNA；

步骤2，以步骤1提取的DNA作为模板，利用引物对NRBP-L-F和NRBP-L-R对其进行PCR扩增：

NRBP-L-F：5’- CGCATGGCTCTTTATAGGCGGA-3’

NRBP-L-R：5’- GCACCAAGTTTATGTTGACAATTTCCC-3’；

步骤3，电泳检测步骤2得到的PCR扩增产物，在一个泳道上仅出现1200 bp的DNA标记条带为皱纹盘鲍，仅出现800 bp的DNA标记条带为绿鲍，同时出现分子量约为1200 bp和800bp的DNA标记条带则是皱纹盘鲍和绿鲍的杂交子代。

4.根据权利要求3所述的分子鉴定方法，其特征在于：步骤2中的PCR扩增体系为50 µL，具体包括：22 µL超纯水、25 µL 商品化PCR preMIX、1 µL10 µM引物NRBP-L-F、1 µL10 µM引物NRBP-L-R、1 µL模板DNA。

5.根据权利要求3所述的分子鉴定方法，其特征在于：步骤2中的扩增步骤为：

①94 °C预变性 4 min

②94 °C变性 30 s

③59 °C退火 30 s

④72 °C延伸 1 min

⑤重复步骤②-④ 31次

⑥72 °C充分延伸 5 min。

6.根据权利要求3所述的分子鉴定方法，其特征在于：步骤3中采用琼脂糖凝胶电泳进行检测。