[发明专利]一种无抗生素介入的细菌表达系统的构建方法及应用在审
| 申请号： | 202210978289.9 | 申请日： | 2022-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN115820707A | 公开（公告）日： | 2023-03-21 |
| 发明（设计）人： | 白芳;岳卓;吴卫辉;程志晖;靳永新 | 申请（专利权）人： | 南开大学 |
| 主分类号： | C12N15/78 | 分类号： | C12N15/78;C12N1/21;C12N15/64;C12N15/60;C07K14/165;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/385 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 苏士莹 |
| 地址： | 300071*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抗生素 介入 细菌 表达 系统 构建 方法 应用 | ||
1.一种腺嘌呤营养缺陷型铜绿假单胞菌PAK-JΔ6(Ade)的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：删除减毒铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAK-JΔ6菌株的基因组中参与从头合成嘌呤核苷酸的磷酸核糖氨基咪唑羧化酶基因purEK，获得腺嘌呤营养缺陷型铜绿假单胞菌PAK-JΔ6(Ade)；所述PAK-JΔ6菌株已完成保藏，保藏编号为CGMCCNo.24851。
2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述参与从头合成嘌呤核苷酸的磷酸核糖氨基咪唑羧化酶基因purEK的核苷酸序列的GenBank gene ID：AAG08810.1-AAG08811.1。
3.利用权利要求1或2所述构建方法构建得到的腺嘌呤营养缺陷型铜绿假单胞菌PAK-JΔ6(Ade)。
4.一种无抗生素介入细菌表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将大肠杆菌-铜绿假单胞菌穿梭载体pExoS54中的氨苄青霉素抗性基因盒替换为磷酸核糖氨基咪唑羧化酶基因purEK的操纵子；
所述磷酸核糖氨基咪唑羧化酶基因purEK的操纵子核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，所述氨苄青霉素抗性基因盒的核苷酸序列GenBank:AAB40011.1。
6.利用权利要求4或5所述构建方法构建得到的无抗生素介入细菌表达载体pExoS54(Ade)。
7.一种无抗生素介入的细菌表达系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将目标蛋白的编码基因克隆到权利要求6所述无抗生素介入细菌表达载体pExoS54(Ade)中，得到目标蛋白表达载体；
将所述目标蛋白表达载体转化入权利要求3所述腺嘌呤营养缺陷型铜绿假单胞菌PAK-JΔ6(Ade)中，获得铜绿假单胞菌外源蛋白表达系统。
8.根据权利要求7所述构建方法，其特征在于，所述目标蛋白包括转录因子、酶、疫苗抗原、结构蛋白、纳米抗体或毒力因子。
9.利用权利要求7或8所述构建方法得到的无抗生素介入的细菌表达系统。
10.权利要求9所述无抗生素介入的细菌表达系统在干细胞定向分化、细胞重编程、细胞基因编辑、蛋白质功能、疫苗开发或抗肿瘤制剂的制备中的应用。
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