[发明专利]一种赭曲霉毒素A的快速检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种赭曲霉毒素A的检测体系，包括氯化血红素、生色底物，其特征在于组成成分还包括核酸适配体Apt、引发链DNA1、互补链DNA2、DNA底物H1、发卡探针H2、辅助探针R、Q、F、富G序列P。

2.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A检测体系，其特征在于所述DNA底物H1环部修饰核糖核苷酸酶的裂解位点；所述识别探针Apt的序列为表一SEQ ID No.1所示序列，所述引发链DNA1的序列为表一SEQ ID No.2所示序列，所述互补链DNA2的序列为表一SEQ ID No.3所示序列，所述DNA底物H1的序列为表一SEQ ID No.4所示序列，所述发卡探针H2的序列为表一SEQ ID No.5所示序列，所述辅助探针R的序列为表一SEQ ID No.6所示序列，所述富G序列P的序列为表一SEQ ID No.7所示序列，所述辅助探针Q的序列为表一SEQ ID No.8所示序列，所述辅助探针F的序列为表一SEQ ID No.9所示序列。

3.根据权利要求1所述的赭曲霉毒素A检测体系，其特征在于所述生色底物为2,2’-联氨-双-[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二氨盐和过氧化氢。

4.一种用于权利要求1所述赭曲霉毒素A的检测体系的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)所述核酸适配体Apt、引发链DNA1、互补链DNA2、DNA底物H1和H2、辅助探针R、Q和F、富G序列P分别在95℃退火处理5min；

(2)经步骤(1)处理的识别探针Apt与引发链DNA1结合为Apt-DNA1复合物；

(3)经步骤(1)处理的辅助探针R、Q和富G序列P结合为R-P-Q三链复合物；

(4)将待测样本加入经步骤(1)(2)(3)处理的Apt-DNA1复合物、互补链DNA2、DNA底物H1和发卡探针H2、R-P-Q三链复合物和辅助探针F；

(5)将所述氯化血红素、2,2’-联氨-双-[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二氨盐和过氧化氢加入反应溶液；

(6)紫外可见分光光度计测定420nm处吸光度。

5.根据权利要求4所述的赭曲霉毒素A检测方法，其特征在于所述退火处理为95℃水浴下5min，缓慢冷却至室温。

6.根据权利要求1～5所述的赭曲霉毒素A检测方法，其特征在于所述Apt-DNA1复合物浓度为20nM、DNA底物H1和发卡探针H2浓度分别为60nM和20nM、R-P-Q三链复合物浓度为300nM、辅助探针F浓度为300nM、所述2,2’-联氨-双-[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二氨盐、过氧化氢浓度分别为4mM和2mM。

7.一种用于权利要求1所述赭曲霉毒素A检测方法的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第一容器，所述第一容器内含所述识别探针Apt、引发链DNA1；

所述试剂盒还包括第二容器，所述第二容器内含所述互补链DNA2；

所述试剂盒还包括第三容器，所述第三容器内含所述DNA底物H1；

所述试剂盒还包括第四容器，所述第四容器内含所述发卡探针H2；

所述试剂盒还包括第五容器，所述第五容器内含所述R-P-Q三链复合物；

所述试剂盒还包括第六容器，所述第六容器内含所述辅助探针F；

所述试剂盒还包括第七容器，所述第七容器内含所述氯化血红素hemin；

所述试剂盒还包括第八容器，所述第八容器内含所述2,2’-联氨-双-[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二氨盐和过氧化氢。

所述试剂盒还包括第九容器，所述第九容器内包含所述20mM的Tris-HCl缓冲溶液：20mM三羟甲基氨基甲烷、100mM NaCl、20mM KCl、10mM MgCl₂、1M HCl调节溶液pH值7.4。

8.一种赭曲霉毒素A检测试剂盒的使用方法，其特征包括权利要求7所述的赭曲霉毒素A检测试剂盒，还包括如下步骤：

(1)取第一容器中的溶液2μL、第二容器中的溶液6μL、第三容器中的溶液2μL、第四、第五容器中的溶液各6μL加入待测溶液中，室温反应120min；

(2)加入第七所述容器中的溶液12μL，室温反应30min；

(3)加入第八所述容器中的溶液6μL，室温反应5min；

加入第九所述容器中的溶液160μL后，在紫外可见分光光度计测定420nm处吸光度。