[发明专利]抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体复合IgY制备方法及其制剂在审
| 申请号： | 201510115475.X | 申请日： | 2015-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN105597097A | 公开（公告）日： | 2016-05-25 |
| 发明（设计）人： | 包晟;杨荣鉴;王长安;曹天福;包海威 | 申请（专利权）人： | 深圳市雅臣爱己生物工程有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/42 | 分类号： | A61K39/42;A61K39/40;A61K39/395;A61K9/127;A61P31/04;A61P31/12;A61P31/10;A23K20/147 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 广东省深圳市龙岗区坂田街*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体复合IgY制备方法及其制剂。采用基因工程或偶联法或常规方法将霉菌毒素、细菌外毒素和病原体制成抗原，分别对产蛋禽类进行免疫，制得抗霉菌毒素、抗细菌外毒素和抗病原体免疫蛋，然后制得不同类型的IgY粗提物；再进行提纯、纳米化、包被及复合，分别得到不同状态的抗霉菌毒素IgY、抗细菌外毒素IgY、抗病原体IgY以及抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体复合IgY；将上述IgY或复合IgY按0.0001％以上的任意比例添加到食品、饲料、保健品或药品中，即得抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体IgY或复合IgY制剂。采用这种IgY或复合IgY及其制剂可有效降解饲料和食品以及粮食中的霉菌毒素，预防和治疗霉菌毒素和细菌外毒素中毒及混合感染疾病。 | ||
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【主权项】：
一种抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体复合IgY制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备抗原：选取霉菌毒素、细菌外毒素或病原体，采用基因工程重组蛋白或偶联载体蛋白或常规方法，分别制成抗原；(2)将步骤(1)制备出的霉菌毒素抗原、细菌外毒素抗原或病原体抗原其中的一种或混合多种按(10‑1)∶(1‑10)的比例加入福氏佐剂，置入高速匀浆器中，以8,000rpm高速匀化，形成油包水液体，即制得不同种类的免疫用抗原；(3)将步骤(2)制备出的免疫用抗原对产蛋禽类进行免疫；每隔二周再强化注射一次，计免疫三次；第一次免疫20天后，分别检取产蛋禽类所产免疫蛋，并进行编码标记，即可分别制得相对应的抗霉菌毒素IgY免疫蛋、抗细菌外毒素IgY免疫蛋和抗病原体IgY免疫蛋；(4)将步骤(3)制得的抗霉菌毒素IgY免疫蛋、抗细菌外毒素IgY免疫蛋或抗病原体IgY免疫蛋用流动水洗净，酒精擦洗消毒，再用打蛋机打碎免疫蛋，采用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀；再按蛋黄液体积的3‑8倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用1.0mol/L HCl溶液调pH至5.5‑6.5；将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2‑15℃，静置12‑24小时；将稀释液于10,000rpm下离心20分钟；取分离所得的上清液置于超滤器中进行超滤浓缩10‑20倍；继而加入重量百分数2.0％的海藻酸钠液，至终浓度为0.1％，搅拌至出现浑浊；再加入重量百分数2.0％CaCl2溶液，至终浓度为0.1％，搅拌均匀，30‑40℃静置8‑12小时；8,000rpm下离心20分钟，取上清液，用0.45μm膜串连0.22μm膜过滤除菌；然后用Ultipor VFTM DV50除病毒过滤器除去病毒；冷冻干燥，即分别制得抗霉菌毒素IgY粗提物、抗细菌外毒素IgY粗提物和抗病原体IgY粗提物；(5)将步骤(4)中制得的抗霉菌毒素IgY粗提物、抗细菌外毒素IgY粗提物或抗病原体IgY粗提物分别溶解于pH7.0、0.01mol/L磷酸盐缓冲液中，再依次分别过离子交换柱和凝胶层析柱层析，冷冻干燥或低温喷雾干燥，即相应制得抗霉菌毒素IgY纯干粉、抗细菌外毒素IgY纯干粉和抗病原体IgY纯干粉；(6)将步骤(5)中制得的抗霉菌毒素IgY纯干粉、抗细菌外毒素IgY纯干粉或抗病原体IgY纯干粉，加入到超微粉碎机中碾磨粉碎，加工成大小在1‑100nm之间、粒度超过≥15000目的超微粒子，即相应制得抗霉菌毒素IgY纳米粉、抗细菌外毒素IgY纳米粉和抗病原体IgY纳米粉；(7)制备IgY纳米脂质体液晶微囊：把卵磷脂和胆固醇溶于乙醚中，再将步骤(6)中制备的抗霉菌毒素IgY纳米粉、抗细菌外毒素IgY纳米粉或抗病原体IgY纳米粉加入4mmol/L磷酸盐缓冲液配成抗毒素IgY纳米粉溶液，超声处理2min(每处理0.5min，间歇0.5min)，立即在水浴中减压旋转蒸发至呈凝胶状，漩涡振荡使凝胶转相，再继续蒸发除尽乙醚，进而超速离心(35000r/min，30min)分离除去未包入的抗毒素IgY纳米粉，将沉淀用水洗二次，离心，取沉淀，用10mmol/L磷酸盐缓冲液稀释，即相应制得抗霉菌毒素IgY纳米脂质体液晶微囊、抗细菌外毒素IgY纳米脂质体液晶微囊和抗病原体IgY纳米脂质体液晶微囊；(8)将步骤(4)‑(7)所得的4组产物组内复合，即得4种状态的多种抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体复合IgY。
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- 本发明涉及生物兽药技术领域，尤其是一种防治HHS的抗原抗体复合物制剂的制备方法，其制作步骤是抗原的制备、制备灭活疫苗、免疫产蛋鸡及收集高免蛋、提取HHS卵黄抗体并纯化和制备抗原抗体复合物制剂，本发明对HHS具有特异性的防治作用，并且不存在耐药性风险，具有特效，药效长，无药残，成本低的特点，在兽医公共卫生安全方面有重要意义。
- 一种防治鸡心包积液-肝炎综合征生物兽药的制备方法-201610076644.8
- 赵成新;莫小见 - 烟台金海药业有限公司
- 2016-02-04 - 2016-07-20 - A61K39/42
- 本发明涉及生物兽药技术领域，尤其是一种防治鸡心包积液‑肝炎综合征生物兽药的制备方法，其制作步骤是抗原的制备、抗原EID50的测定、制备灭活疫苗、产蛋鸡的免疫、高免蛋的收集和提取抗鸡心包积液‑肝炎综合征卵黄抗体，本发明提供一种治疗鸡心包积液‑肝炎综合征卵黄抗体生物兽药，通过用鸡心包积液‑肝炎综合征患病鸡的肝组织匀浆液接种鸡胚增殖病毒，并制得灭活疫苗免疫产蛋鸡，然后从蛋黄中提取的一种蛋白质。将该蛋白质用于防治鸡心包积液‑肝炎综合征，来解决目前没有合适的治疗鸡心包积液‑肝炎综合征针对性兽用药物、现有流行的治疗方案成本高、效果差的问题。
- 猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的制备方法-201410759761.5
- 索江华;江青东;何金环 - 郑州牧业工程高等专科学校
- 2014-12-12 - 2016-07-06 - A61K39/42
- 本发明公开了一种猪圆环病毒2型高免卵黄抗体的制备方法，首先自制疫苗，将无菌采集发病猪的肺脏、肝脏和脑及淋巴结组织，用l000U/mL的双抗液冲洗表面后按1：2的比例加入20％铝胶生理盐水，再处理制成疫苗；然后对蛋鸡肌注猪圆环病毒2型自家组织灭活疫苗制备高免卵黄抗体。本发明是自治猪圆环病毒2型组织灭活苗，免疫鸡，收集高免卵后制备卵黄抗体，用于治疗发病猪，通过临床验证，效果良好。
- 一种含复合亚型免疫抗体的禽流感免疫鸡蛋生产制程方法-201410737016.0
- 郑长义 - 郑长义
- 2014-12-06 - 2016-07-06 - A61K39/42
- 一种含复合亚型免疫抗体的禽流感免疫鸡蛋生产制程方法，特别是将制备的减毒复合病毒株经解冻后加入抗生素灭菌后直接接种于12日龄鸡胚胎受精鸡蛋中，再抽取尿囊液作病毒培殖、制作成疫苗后施打于产蛋中的蛋鸡体内，再于二周及三周后各追加一剂，并于届满八周与十二周龄再各追补一剂。蛋鸡施打复合病毒疫苗(如H5N1及H7N9或H10N8)使鸡只体内产生抗体，经由血清移转到蛋黄中，第四周其产蛋的蛋黄即含有禽流感复合病毒株的免疫抗体Immunoglobulin of yolk(IgY)，且其抗体力价呈现稳定状态，该免疫鸡蛋供人食用，借被动免疫原理，使食用者具预防禽流感的效果。
- 一种抗巨细胞病毒人源化抗体药物-201610135918.6
- 刘奋勇;王宇 - 江苏亲合力病毒检测工程有限公司
- 2016-03-11 - 2016-06-15 - A61K39/42
- 本发明公开了一种抗巨细胞病毒人源化抗体药物，它包括对Fc的改造，提高Tm、T1/2，增强ADCC、CDC；噬菌体和酵母表面展示抗体库的构建；通过CPG2006/IL-2提高EBV促IgG+记忆性B细胞永生化效率。本发明通过对人源化抗体Fc区的定点突变和分子重构，增强其生物学功能，结合酵母表面展示技术，构建新型人源化抗体库；建立并改进EB病毒（EBV）感染IgG+记忆性B细胞使其永生化、从恢复期病人血细胞中筛选针对特定病毒的人源化单克隆抗体的技术平台；构建具有自主知识产权的针对HCMV的高效治疗性抗体，该抗体可以高效特异的在体外及细胞内针对HCMV的抗体进行筛选。
- 抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体复合IgY制备方法及其制剂-201510115475.X
- 包晟;杨荣鉴;王长安;曹天福;包海威 - 深圳市雅臣爱己生物工程有限公司
- 2015-03-17 - 2016-05-25 - A61K39/42
- 本发明涉及抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体复合IgY制备方法及其制剂。采用基因工程或偶联法或常规方法将霉菌毒素、细菌外毒素和病原体制成抗原，分别对产蛋禽类进行免疫，制得抗霉菌毒素、抗细菌外毒素和抗病原体免疫蛋，然后制得不同类型的IgY粗提物；再进行提纯、纳米化、包被及复合，分别得到不同状态的抗霉菌毒素IgY、抗细菌外毒素IgY、抗病原体IgY以及抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体复合IgY；将上述IgY或复合IgY按0.0001％以上的任意比例添加到食品、饲料、保健品或药品中，即得抗霉菌毒素和细菌外毒素及病原体IgY或复合IgY制剂。采用这种IgY或复合IgY及其制剂可有效降解饲料和食品以及粮食中的霉菌毒素，预防和治疗霉菌毒素和细菌外毒素中毒及混合感染疾病。
- 一种用于治疗仔猪流行性腹泻的卵黄抗体口服剂及其制备方法-201510884902.0
- 宁昆;刘佩红;周锦萍;王建;张维谊;杨德全;齐新永;葛菲菲;李鑫 - 上海市动物疫病预防控制中心
- 2015-12-04 - 2016-03-23 - A61K39/42
- 本发明提供了一种用于治疗仔猪流行性腹泻的卵黄抗体口服剂，含有以PEDV流行毒株保护性抗原基因COE蛋白免疫非免疫产蛋鸡后收集的鸡蛋卵黄中提取的卵黄抗体。本发明还提供了上述口服剂的制备方法，以当前流行毒株为基础，对猪流行性腹泻病毒的保护性抗原基因COE进行原核表达、纯化，获得目的蛋白，用弗氏佐剂制备成免疫原接种非免疫蛋鸡，免疫后收集鸡蛋，从蛋黄中提取出卵黄抗体并将其制备成安全、高效的卵黄抗体口服剂。本发明的卵黄抗体口服剂能对仔猪流行性腹泻病猪进行有效的治疗，同时也可运用该口服剂对同群未感染的仔猪进行预防，该口服剂制备工艺简单，适合规模化生产及临床应用。
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