[发明专利]一种棕点石斑鱼微卫星标记及其引物

权利要求书

1.一种棕点石斑鱼的SSR分子标记，其特征在于，包括如下分子标记：EFDSSR-01、EFDSSR-02、EFDSSR-03、EFDSSR-04、EFDSSR-05、EFDSSR-06、EFDSSR-07和EFDSSR-08；

其中，所述EFDSSR-01～EFDSSR-08的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～8所示。

2.权利要求1所述的SSR分子标记的扩增引物。

3.根据权利要求2所述的扩增引物，其特征在于，包括：

扩增EFDSSR-01的引物对，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10所示的上、下游引物；

扩增EFDSSR-02的引物对，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO.11～12所示的上、下游引物；

扩增EFDSSR-03的引物对，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO.13～14所示的上、下游引物；

扩增EFDSSR-04的引物对，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO.15～16所示的上、下游引物；

扩增EFDSSR-05的引物对，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO.17～18所示的上、下游引物；

扩增EFDSSR-06的引物对，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO.19～20所示的上、下游引物；

扩增EFDSSR-07的引物对，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO.21～22所示的上、下游引物；

扩增EFDSSR-08的引物对，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO.23～24所示的上、下游引物。

4.根据权利要求3所述的扩增引物，其特征在于，所述的扩增引物的上游引物的5'端标记有荧光基团；所述的荧光基团为ROX、FAM、HEX或TAMRA。

5.一种用于棕点石斑鱼群体遗传多样性分析及种群鉴定的试剂盒，其特征在于，包含权利要求2～4任一项所述的扩增引物以及可接受的其他试剂盒组分。

6.权利要求1所述的SSR标记、权利要求2～4任一项所述的扩增引物或权利要求5所述的试剂盒在棕点石斑鱼群体遗传多样性分析及种群鉴定中的应用。

7.一种评估棕点石斑鱼种群遗传多样性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)收集棕点石斑鱼群体样本，提取棕点石斑鱼个体DNA；

2)以步骤1)提取的基因组DNA为模板，利用权利要求2～4任一项所述的扩增引物进行PCR扩增；

3)对步骤2)扩增的PCR产物进行分型；

4)对步骤3)获得的分型结果进行遗传多样性分析。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2)中，

所述的PCR扩增的反应体系为25μL，包括：不含Mg²⁺的10×PCR buffer2.5μL、25mMMgCl₂2.0μL、10mMdNTP0.5μL、高保真PCR酶1U、10μM正向引物0.5μL、10μM反向引物0.5μL、DNA模板12.5ng，无菌双蒸水补足至25μL；

所述PCR扩增的程序为：

95℃预变性5分钟；

95℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，共35个循环；

72℃再延伸6分钟。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，利用GenAIex软件进行遗传多样性分析，所述遗传多样性分析的指标包括每个位点的等位基因数、有效等位基因数、香农信息指数、观测杂合度、期望杂合度、固定指数中的至少一种。

10.权利要求1所述的SSR标记、权利要求2所述的扩增引物、权利要求5所述的试剂盒或权利要求8所述的评估方法在棕点石斑鱼养殖群体、放流群体、自然群体遗传多样性分析中的应用。