[发明专利]酶组合物及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及酶组合物及其应用。本发明提供了酶组合物包括：查尔酮合成酶CHS和查尔酮异构酶样蛋白CHIL；查尔酮合成酶包括灯盏花EbCHS；查尔酮异构酶样蛋白包括：高粱SbCHIL和/或大豆GmCHIL。本发明提供了在酿酒酵母中将CHIL引入对香豆酸到柚皮素的合成过程，有效的提高了柚皮素的合成能力，这为柚皮素的工业化生产奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及酶组合物及其应用。

背景技术

柚皮素(Naringenin)，化学名为4’,5,7-三羟基黄酮，属于二氢黄酮类化合物。柚皮素具有抗菌、抗炎、抗癌和抗氧化等生理药理活性，广泛应用于食品、保健品及医药领域。柚皮素作为黄酮类化合物的骨架结构，可经多步反应生成黄酮、异黄酮、黄烷酮、黄酮醇、花色素等化合物。

以对香豆酸为前体，首先经4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate-CoA ligase,4CL)催化生成对香豆酰-CoA，然后1分子对香豆酰-CoA与3分子丙二酰-CoA经查尔酮合成酶(Chalcone synthase,CHS)催化发生克莱森缩合反应生成柚皮素查尔酮，进而经查耳酮异构酶(Chalcone isomerase,CHI)作用发生立体异构闭环生成柚皮素，如图4所示。

查耳酮异构酶样蛋白(CHI-Like protein)CHIL，是一种IV型CHI，但缺乏CHI的活性。在植物中，CHIL与同物种的CHS共表达，可以纠正CHS催化的混杂性，进而促进类黄酮化合物的合成。如已鉴定的拟南芥来源的AtCHIL与同物种的CHS共表达，可以增强植物中花色素和黄酮醇的合成，但尚未有CHIL在酿酒酵母中合成柚皮素的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了酶组合物及其应用。本发明提供了在酿酒酵母中将CHIL引入对香豆酸到柚皮素的合成过程，有效的提高了柚皮素的合成能力。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了酶组合物包括：查尔酮合成酶和查尔酮异构酶样蛋白；

所述查尔酮合成酶包括：灯盏花EbCHS；

所述查尔酮异构酶样蛋白包括：高粱SbCHIL和/或大豆GmCHIL。

具体的，在本发明的一些实施方案中，上述酶组合物中：

由所述灯盏花EbCHS和所述高粱SbCHIL组成；或

由所述灯盏花EbCHS和所述大豆GmCHIL组成。

在本发明的一些实施方案中，上述酶组合物中所述灯盏花EbCHS具有：

(1)、如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；或

(2)、在如(1)所示的氨基酸序列的基础上经取代、缺失、添加和/或替换1个或多个氨基酸的序列；或

(3)、与(1)或(2)所示的氨基酸序列同源性90％以上的序列；和

所述高粱SbCHIL具有：

(4)、如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；或

(5)、在如(4)所示的氨基酸序列的基础上经取代、缺失、添加和/或替换1个或多个氨基酸的序列；或

(6)、与(4)或(5)所示的氨基酸序列同源性90％以上的序列；或

所述大豆GmCHIL具有：

(7)、如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；或

(8)、在如(7)所示的氨基酸序列的基础上经取代、缺失、添加和/或替换1个或多个氨基酸的序列；或