[发明专利]用于扩增EGFR-T790M基因变异的blocker探针、引物组及其应用

权利要求书

1.用于扩增EGFR-T790M基因变异的blocker探针，其特征在于，所述blocker探针的核苷酸序列选自SEQ ID No.1~4中任一种，SEQ ID No.1所示核苷酸序列为CTCATCACGCAGCTC，SEQ ID No.2所示核苷酸序列为CTCATCACGCAGCTC，SEQ ID No.3所示核苷酸序列为CTCATCACGCAGCTCATG，SEQ ID No.4所示核苷酸序列为CTCATCACGCAGCTCATGC；所述blocker探针的3’端经过延伸阻断修饰，所述blocker探针中斜体并字体加粗标出的核苷酸对应突变位点，下划线表示该核苷酸经过锁核酸修饰。

2.用于扩增EGFR-T790M基因变异的引物组，其特征在于，所述引物组包括权利要求1所述的blocker探针、两条上游引物和至少一条下游引物；

所述两条上游引物的核苷酸序列均覆盖EGFR-T790M基因前的SNP位点rs1050171，其中第一上游引物的核苷酸序列为X_m1AX_n1，所述X_m1为rs1050171位点上游m1个与EGFR-T790M基因片段匹配核苷酸，所述X_n1为rs1050171位点下游n1个与EGFR-T790M基因片段匹配核苷酸，第二上游引物的核苷酸序列为X_m2GX_n2，所述X_m2为rs1050171位点上游m2个与EGFR-T790M基因片段匹配核苷酸，所述X_n2为rs1050171位点下游n2个与EGFR-T790M基因片段匹配核苷酸，所述n1和n2均选自3~7中任意数值；

所述两条上游引物的3’端与blocker探针的5’端存在核苷酸重叠，重叠的核苷酸数量为1~7。

3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，所述引物组还包括荧光探针，所述荧光探针结合EGFR-T790M基因的反义链。

4.权利要求1所述blocker探针或权利要求2或3所述引物组的用途，所述用途包括：

（1）制备选择性扩增EGFR-T790M基因突变型的制剂、PCR反应体系或试剂盒；或者，

（2）EGFR-T790M基因突变型检测前扩增富集；或者，

（3）EGFR-T790M基因突变型检测前建库。

5.非诊断目的的EGFR-T790M基因突变型选择性扩增方法，其特征在于，使用权利要求1所述blocker探针或权利要求2或3所述引物组配置PCR反应体系，待扩增样本经变性、退火和延伸后，分析扩增产物；

所述退火温度和延伸温度相同，选自54~62℃。