[发明专利]基于λ核酸外切酶选择性消化实现的急性白血病Pax-5a基因检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.基于λ核酸外切酶选择性消化实现的急性白血病Pax-5a基因检测试剂盒，其特征在于：包括HP-HCR链、H1链、H2链、缓冲液体系和λ核酸外切酶。

2.根据权利要求1所述的急性白血病Pax-5a基因检测试剂盒，其特征在于：所述HP-HCR链序列为5’-ACTGAGTCTCCCCATGCCTGAGAGATGCGGTGATCCTTGAGACTTCAGATCTCAAGGATCACCGCATCTCTCA-3’、H1链序列为5’-TGAGAGATGCGGT-FAM-GATCCTTGAGACTAAGTTCTCAAGGAT-BHQ-CACCGCAT-3’、H2链序列为5’-TCTCAAGGAT-FAM-CACCGCATCTCTCAATGCGGT-BHQ-GATCCTTGAGAACTTAG-3’。

3.根据权利要求2所述的急性白血病Pax-5a 基因检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液体系为pH=7.9的1 × NEB Buffer2，其中含有100 mM Tris HCl、100 mM MgCl₂、10 mMdithiothreitol、500 mM NaCl。

4.权利要求3所述的急性白血病Pax-5a基因检测试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤如下：

（1）配制HP-HCR链溶液，然后与待测溶液混合后，加入缓冲液体系，37℃孵育1小时得反应体系；

（2）向步骤（1）的反应体系中加入1 μL λ核酸外切酶，37℃孵育15分钟，然后加热使酶失活；

（3）经步骤（2）处理后的反应体系冷却至室温后，再加入H1、H2链溶液，37℃孵育75分钟，经荧光光度计收集荧光信号，代入线性方程计算得待测溶液的浓度。

5.根据权利要求4所述的急性白血病Pax-5a 基因检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中HP-HCR链的浓度为10 μM。

6.根据权利要求4所述的急性白血病Pax-5a基因检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中λ核酸外切酶的浓度为500 U/mL。

7.根据权利要求4所述的急性白血病Pax-5a基因检测方法，其特征在于：所述步骤（3）中H1链溶液和H2链溶液的浓度均为10 μM，H1链溶液和H2链溶液的加入量均为1μL。

8.根据权利要求4所述的急性白血病Pax-5a基因检测方法，其特征在于：所述步骤（4）中收集荧光信号时采用的激发波长为492 nm，发射波长的检测范围为490 nm-650 nm，扫描速度为1200 nm/min。

9.根据权利要求4所述的急性白血病Pax-5a基因检测方法，其特征在于：所述步骤（4）中线性方程为分段式方程，当荧光信号为5000-7000 a.u.时，线性方程为y=910.06lg(x)+6674.3，R²=0.99352；当荧光信号为（1-6）×10⁴ a.u.时，线性方程为y=22034.7096lg(x)+8492.9880，R²=0.9936。