[发明专利]一种组织蛋白酶K的制备方法

说明书

本发明公开了一种组织蛋白酶K的制备方法。所述方法包括如下步骤：使融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达，得到所述组织蛋白酶K；所述融合蛋白为将PelB信号肽融合于组织蛋白酶K的N端后所得。本发明基于原核表达系统采用四种不同信号肽DsbA、OmpA、PelB和STII制备组织蛋白酶K，并通过对组织蛋白酶K表达量进行分析发现：PelB信号肽可以高效引导组织蛋白酶K分泌至周质空间，其表达量显著高于其它信号肽，是组织蛋白酶K周质空间分泌表达的最佳信号肽，不仅在组织蛋白酶K制品的表达和制备中具有良好的应用前景，还对开发组织蛋白酶K的单克隆抗体或小分子抑制剂及治疗骨质疏松症的药物研发具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种组织蛋白酶K的制备方法。

背景技术

组织蛋白酶是一种广泛存在于溶酶体中的蛋白质水解酶，具有维持细胞内动态平衡的作用。根据组织蛋白酶活性中心氨基酸残基分为半胱氨酸蛋白酶家族(组织蛋白酶B、C、F、H、K、L、O、S、V、X和W)，天门冬氨酸(组织蛋白酶D和E)和丝氨酸类蛋白酶(组织蛋白酶A和G)。其中，组织蛋白酶K(Cathepsin K，CTSK)参与分解骨骼组织中多种蛋白质，包括I型胶原蛋白、骨桥蛋白和骨结合素等，对于调节骨平衡具有重要的意义。

骨质疏松症是在骨代谢过程中骨吸收大于骨形成导致的一种常见老年多发疾病。骨吸收过程中，破骨细胞首先附着于骨骼表面，形成相对封闭的骨吸收环境，分泌质子和蛋白水解酶，先溶解骨矿物质，继而降解骨基质，导致骨空洞形成。在溶骨过程中，发挥主要作用的就是组织蛋白酶中的组织蛋白酶K(CTSK)。因此，开发组织蛋白酶K(CTSK)的单克隆抗体或抑制剂，可能成为治疗骨质疏松症的途径。但目前关于组织蛋白酶K(CTSK)表达与制备的报道较少。

发明内容

本发明的目的是提供一种组织蛋白酶K的制备方法。

为了实现上述目的，本发明首先提供了PelB信号肽的新用途。

本发明提供了PelB信号肽在如下A1)-A4)中任一种中的应用：

A1)制备组织蛋白酶K或其融合蛋白；

A2)提高组织蛋白酶K或其融合蛋白表达量或产量；

A3)制备组织蛋白酶K检测产品；

A4)开发或筛选组织蛋白酶K靶点药物；

所述PelB信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。

与所述PelB信号肽相关的生物材料在如下A1)-A4)中任一种中的应用也属于本发明的保护范围：

A1)制备组织蛋白酶K或其融合蛋白；

A2)提高组织蛋白酶K或其融合蛋白表达量或产量；

A3)制备组织蛋白酶K检测产品；

A4)开发或筛选组织蛋白酶K靶点药物；

与所述PelB信号肽相关的生物材料为所述PelB信号肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞系。

所述PelB信号肽的编码基因为如下(a1)-(a3)中任一种：

(a1)SEQ ID No.5第7-69位所示的DNA分子；

(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码上述PelB信号肽的DNA分子；

(a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有75％以上同一性且编码上述PelB信号肽的DNA分子。

为了实现上述目的，本发明又提供了一种融合蛋白。