本发明公开了一种V8蛋白酶的制备方法。所述方法包括如下步骤：使融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达，得到所述V8蛋白酶，所述融合蛋白为将PelB信号肽融合于V8蛋白酶的N端后所得；所述PelB信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。本发明采用四种不同信号肽Sig、DsbA、PelB和STII制备V8蛋白酶，并通过对V8蛋白酶表达量进行分析发现：PelB信号肽可以高效引导V8蛋白酶分泌至周质空间，其表达量显著高于其它信号肽，是V8蛋白酶周质空间分泌表达的最佳信号肽，可用于V8蛋白酶制品的表达和制备工作。
本发明公开了一种重组人促卵泡生成素CTP‑Fc融合蛋白及制备方法。本发明提供了SEQ ID No.5所示信号肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：A1)制备FSH蛋白或其融合蛋白；A2)提高FSH蛋白或其融合蛋白的表达量或产量；A3)促进FSH蛋白或其融合蛋白分泌到宿主细胞外；本发明采用FSH‑CTP‑Fc融合蛋白的三种信号肽用于引导FSH‑CTP‑Fc融合蛋白真核细胞分泌表达，人工改造信号肽SP1分泌表达量显著优于抗体轻链信号肽SP2和荧光素酶信号肽SP3，更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。
本发明公开了一种A/Darwin/9/2021(H3N2)HA抗原制备方法。本发明提供了SEQ ID No.1所示多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：提高流感毒株A/Darwin/9/2021(H3N2)HA抗原在宿主细胞中的分泌表达产量或在宿主细胞中的分泌表达效率或制备流感毒株A/Darwin/9/2021(H3N2)HA抗原分泌蛋白制品。本发明结果显示人工信号肽SP1分泌表达水平显著优于天然信号肽Ha，更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。
本发明公开了一种抗PD‑L1的人源化纳米抗体及其应用。本发明提供的纳米抗体，包含3个互补决定区，其中CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.4，CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.6，CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.9。本发明在抗PD‑L1的骆驼源纳米抗体基础上，通过人源化改造和实验验证，抗PD‑L1人源化纳米抗体M2（SEQ ID No.11）和M5（SEQ ID No.12）亲和力分别提高2.54，6.47倍，获得特异性结合PD‑L1的人源化纳米抗体，克服骆驼源纳米抗体在临床应用的局限性，预期用于治疗PD‑L1表达的肿瘤或PD‑L1蛋白的诊断检测。
本发明公开了特异性结合人质膜膜泡关联蛋白PV‑1的人源化抗体及其应用。具体地公开了轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.16、18、20、22或24，和重链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.15、17、19、21或23的人源化抗体。本发明通过对鼠源单抗的结构和序列信息进行生物信息学分析，PTMs风险评估，3D同源建模，种系选择，CDR移植，回复突变，改造获得人源化抗体。本发明的人源化抗体非特性吸附能力弱且胶体稳定性强、具有较高的人源化程度、不易引发免疫原性反应、亲和力高，可制成临床上用于治疗PV‑1过表达相关疾病的抗体药物，在药物应用等领域具有十分广阔的前景和重要的生物医学意义。
本发明公开了特异性结合PV‑1蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用。该抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:11的第26‑35位所示；所述重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:11的第50‑66位所示；所述重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:11的第97‑101位所示；所述轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:21的第24‑34位所示；所述轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:21的第50‑56位所示；所述轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:21的第89‑97位所示。该抗体或其抗原结合片段亲和力比原始抗体提高1‑2个数量级，理论可降低用药剂量，加速PV‑1新靶点的临床药物开发。
本发明公开了一种A/Cambodia/e0826360/2020(H3N2)HA抗原制备方法。本发明提供了SEQ ID No.1所示多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：提高流感毒株A/Cambodia/e0826360/2020(H3N2)HA抗原在真核宿主细胞中的分泌表达产量或分泌表达效率；制备流感毒株A/Cambodia/e0826360/2020(H3N2)HA抗原分泌蛋白制品。本发明采用白蛋白信号肽A1引导流感毒株A/Cambodia/e0826360/2020(H3N2)HA真核细胞分泌表达，效果显著优于天然信号肽Ha和人工信号肽SPl，本发明技术方案更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。
本发明公开了一种A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09HA抗原制备方法。本发明提供了SEQ ID No.1所示多肽或其相关生物材料在如下任一中的应用：提高流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09HA抗原在真核宿主细胞中的分泌表达产量或分泌表达效率；制备流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09HA抗原分泌蛋白制品。本发明采用人工信号肽SP1引导流感毒株A/Victoria/2570/2019(H1N1)pdm09HA真核细胞分泌表达，效果显著优于天然信号肽Ha和白蛋白信号肽Al，本发明技术方案更适用于大规模工业化生产，降低生产成本。
本发明公开了特异性结合PV‑1蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用。该抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，重链可变区和轻链可变区的决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；重链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：03等的第26‑35位所示；重链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：03等的第50‑66位所示；重链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：03等的第97‑101位所示；轻链可变区的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO：04等的第24‑34位所示；轻链可变区的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO：04等的第50‑56位所示；轻链可变区的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO：04等的第89‑97位所示。该抗体或其抗原结合片段亲和力比原始抗体提高1‑2个数量级，理论可降低用药剂量，加速PV‑1新靶点的临床药物开发。
