[发明专利]一种组织蛋白酶K的制备方法

权利要求书

1.PelB信号肽在如下A1)-A4)中任一种中的应用：

A1)制备组织蛋白酶K或其融合蛋白；

A2)提高组织蛋白酶K或其融合蛋白表达量或产量；

A3)制备组织蛋白酶K检测产品；

A4)开发或筛选组织蛋白酶K靶点药物；

所述PelB信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。

2.与PelB信号肽相关的生物材料在如下A1)-A4)中任一种中的应用：

A1)制备组织蛋白酶K或其融合蛋白；

A2)提高组织蛋白酶K或其融合蛋白表达量或产量；

A3)制备组织蛋白酶K检测产品；

A4)开发或筛选组织蛋白酶K靶点药物；

所述与PelB信号肽相关的生物材料为所述PelB信号肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞系。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述编码基因为如下(a1)-(a3)中任一种：

(a1)SEQ ID No.5第7-69位所示的DNA分子；

(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1中所述PelB信号肽的DNA分子；

(a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有75％以上同一性且编码权利要求1中所述PelB信号肽的DNA分子。

4.融合蛋白，为将权利要求1中所述PelB信号肽融合于组织蛋白酶K的N端后所得。

5.与权利要求4所述融合蛋白相关的生物材料，所述生物材料为权利要求4所述融合蛋白的编码基因或含有所述编码基因的表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞系。

6.根据权利要求5所述的生物材料，其特征在于：所述编码基因为如下(b1)-(b3)中任一种：

(b1)SEQ ID No.5第7-867位所示的DNA分子；

(b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求4所述融合蛋白的DNA分子；

(b3)与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有75％以上同一性且编码权利要求4所述融合蛋白的DNA分子。

7.权利要求4所述的融合蛋白或权利要求5所述的生物材料在如下A1)-A4)中任一种中的应用：

A1)制备组织蛋白酶K或其融合蛋白；

A2)提高组织蛋白酶K或其融合蛋白表达量或产量；

A3)制备组织蛋白酶K检测产品；

A4)开发或筛选组织蛋白酶K靶点药物。

8.一种制备组织蛋白酶K的方法，包括如下步骤：使权利要求4所述的融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达，得到所述组织蛋白酶K。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

1)将权利要求4所述融合蛋白的编码基因导入宿主菌，得到重组菌；

2)将所述重组菌进行诱导培养，得到诱导菌液；

3)从所述诱导菌液中提取周质空间蛋白，并从所述周质空间蛋白中纯化得到所述组织蛋白酶K。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述诱导培养的方法包括如下步骤：培养所述重组菌至OD_600nm值为0.6-1.0时，向培养体系中添加0.8-1.2mM的IPTG进行诱导培养。