[发明专利]一种综合系统评价外泌体质量的方法

权利要求书

1.一种综合系统评价外泌体质量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

从HepG2细胞培养上清中提取外泌体，向外泌体中分别添加不同浓度海藻糖设置为实验组，再将各实验组放入-80℃冻融5次(Fresh组除外)；进行检测，并根据下述指标建立海藻糖对外泌体质量影响的评价体系；

(1)测量外泌体直径，观察外泌体的形态结构；

(2)检测蛋白质浓度，检测生物标记蛋白质HSP70、TSG101、CD63的变化；

(3)检测外泌体上清中脂质组的含量，测量外泌体膜Zeta电位；

(4)检测外泌体刺激巨噬细胞48h TNF-α的相对表达量。

2.根据权利要求1所述综合系统评价外泌体质量的方法，其特征在于，所述实验组分别为Fresh组、10％DMSO组、PBS组、5mM组、25mM组、125mM组。

3.根据权利要求1所述综合系统评价外泌体质量的方法，其特征在于，所述检测外泌体刺激巨噬细胞分泌的TNF-α，具体步骤如下：(1)总RNA的提取；(2)RNA逆转录；(3)荧光定量PCR。

4.根据权利要求3所述综合系统评价外泌体质量的方法，其特征在于，所述步骤(3)荧光定量PCR的引物序列为5’ATGAGCACTGAAAGCATGATC、3’TCACAGGGCAATGATCCCAAAGTAGACCTGCCC、5’GTGGGGCGCCCCAGGCACCA、3’CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC。