[发明专利]番茄ps-2基因的KASP标记开发及应用

权利要求书

1.番茄ps-2基因的KASP标记开发，其特征在于，包括：

（1）番茄材料选定：

纯合雄性不育材料MS7015和番茄材料P1059，ps-2基因定位于第4条染色体，该基因和ful基因连锁，且ps-2番茄雄性不育基因为隐性单基因；

（2）番茄叶片DNA提取：

采用CTAB法从番茄叶片中提取基因组DNA；

（3）使用KASP引物进行PCR扩增：

KASP引物包括F3引物、F4引物，F3引物的核苷酸序列为：Kps-2-wild-rfF3：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCGTTAATTTATCGATACC，F4引物的核苷酸序列为：Kps-2-mut-shF4：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCGTTAATTTATCGATACG，反向引物Kps-2R5：AATATTCAAATTTCTGATTCCACCA，其中Kps-2-wild-rfF3和Kps-2-mut-shF4引物中GAAGGTGACCAAGTTCATGC序列和GAAGGTCGGAGTCAACGGATT序列分别对应FAM荧光标签和HEX荧光标签序列；

将提取的DNA分别加入全裙边96孔板，配制反应体系进行PCR扩增反应。

2.根据权利要求1所述的番茄ps-2基因的KASP标记开发，其特征在于：所述反应体系为PCR反应体系：反应体系总体积10ul，其中2X KASP Master mix：5ul，KASP Primer mix：0.14ul，模板DNA：1ul，ddH20：3.86ul；

PCR反应程序：94℃预变性15min；94℃变性20s；61-55℃退火延伸60s，10个循环；94℃变性20s；55℃退火延伸60s，26个循环；PCR反应使用Applied Biosystems 7500Real-TimePCR System进行。

3.根据权利要求2所述的番茄ps-2基因的KASP标记开发，其特征在于，包括：对扩增产物的检测和分析：使用Applied Biosystems 7500Real-Time PCR System自带的软件对PCR产物进行基因分型和数据分析。

4.根据权利要求3所述的番茄ps-2基因的KASP标记开发的应用，其特征在于：用于番茄ps-2雄性不育基因的分子标记辅助育种。