[发明专利]一种鉴定自交不亲和系Ⅱ类S单元型青花菜的引物对及其应用和鉴定方法

说明书

本发明公开了一种鉴定自交不亲和系Ⅱ类S单元型青花菜的引物对及其应用和鉴定方法，属于生物技术领域。该引物对包括引物SP11‑2F和引物SP11‑2R；引物SP11‑2F的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，引物SP11‑2R的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。上述引物对可以特异性地扩增出SP11基因的DNA片段，通过一次扩增即可鉴定出待测样本是否为自交不亲和系Ⅱ类S单元型青花菜，相应的鉴定方法不仅简单便捷，还具有准确性和灵敏度高、检测速度快、稳定性高、特异性强的特点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种鉴定自交不亲和系Ⅱ类S单元型青花菜的引物对及其应用和鉴定方法。

背景技术

青花菜(Brassica oleracea L.var.italica)又名西兰花，属十字花科芸薹属甘蓝种，原产于地中海东部沿岸地区，具有很高的营养和保健价值。十字花科植物具有自交不亲和特性，为显花植物在长期进化过程中，防止近亲繁殖、保证遗传多样性和物种延续的重要遗传机制。青花菜属于典型的孢子体自交不亲和体系，由一个具有复等位基因且高度多态性的S位点控制。每一个S位点包含多个S等位基因，又称S单元型，且存在编码雌、雄S决定因子的基因。目前，已知与S位点连琐的基因有3类，分别为S位点受体激酶(S-locusreceptor kinase)基因、S位点糖蛋白(S-locus glycoprotein)基因、S位点蛋白11(S-locus protein 11)和S位点富半胱氨酸蛋白基因(S-locus cysteine-rich protein)基因。SCR/SP11基因在雄蕊花药中表达，而SRK和SLG基因在雌蕊柱头中表达。其自交不亲和现象为花粉和柱头乳突细胞间的相互识别等发生一系列的生化反应，使柱头具有识别自体花粉和异体花粉的能力。

青花菜育种工作国内起步较晚，自交不亲和系制种是杂种优势利用的重要途径之一，因此前期的育种工作重点均集中在自交不亲和系的选育。然而近年来市场供应的青花菜商品种几乎为细胞质雄性不育(CMS)，即表现为花粉败育、雌蕊正常，此特性可免去蕾期人工去雄，节省大量的人力物力，并提高了杂交种子的纯度，然而无法留种进行自交分离选育育种工作，导致种源“卡脖子”问题。青花菜品种CMS系的广泛应用，使得育种选育工作方向转变，自交不亲和系的材料选育转变为自交亲和系材料选育。目前育种家拥有的高世代亲本材料基本上为自交不亲和系，特别是作为母本的亲本材料基本上表现为强自交不亲和性，仍需要蕾期人工授粉、种子产量低等问题，因此自交亲和系材料的选育筛选工作急需跟进。

根据S位点基因序列的相似性，芸薹属自交不亲和等位基因分为两大类：Ⅰ类和Ⅱ类。其中Ⅰ类S单元型为强自交不亲和性，Ⅱ类S单元型为弱自交不亲和性。已知文献报道区分自交不亲和系Ⅰ类S单元型的引物PK1/PK4，Ⅱ类S单元型的引物KD4/KD7，均根据SRK基因进行设计的，并成功用于甘蓝、白菜等芸苔属作物的筛选工作，然而该两对引物的扩增片段均在1kb左右，大片段条带对制胶浓度、跑胶条件要求严格，才能获得干净清晰不拖尾带型，而且存在扩增条带不稳定的问题，需要试验重复才能准确判断材料的自交不亲和类型。而目前报道的青花菜作物根据SP11基因设计地相关引物,实际用于材料鉴定上无法有效地区分自交不亲和系Ⅰ类和Ⅱ类S单元型。因此本研究针对SP11基因开发出新的特异引物,用于青花菜自交不亲和系Ⅱ类S单元型的筛选，也就是自交亲和系材料的选育筛选。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种鉴定自交不亲和系Ⅱ类S单元型青花菜的引物对，该引物对通过扩增可以快速、准确地鉴定出自交不亲和系Ⅱ类S单元型青花菜。

本发明的第二目的在于提供一种鉴定自交不亲和系Ⅱ类S单元型青花菜的产品。

本发明的第三目的在于提供上述鉴定引物或产品在鉴定自交不亲和系Ⅱ类S单元型青花菜中的应用。

本发明的第四目的在于提供上述鉴定引物对或产品在自交不亲和系Ⅱ类S单元型青花菜育种中的应用。