[发明专利]一种鲁氏酵母及其诱变筛选方法和应用

说明书

本发明提供了一种鲁氏酵母及其诱变筛选方法和应用，属于微生物诱变和发酵技术领域；本发明以能够代谢葡萄糖生产D‑阿拉伯糖醇的鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)为出发菌株，经过常压室温等离子体(Atmospheric and Room Temperature Plasma,ARTP)诱变筛选得到了一株能够利用葡萄糖有效生产D‑阿拉伯糖醇的突变株，有效提升了天然菌株的发酵能力，所述突变株记为鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月14日，保藏地址为中国武汉，保藏号为CCTCC NO：M 2022075。

技术领域

本发明微生物诱变和发酵技术领域，具体涉及一种鲁氏酵母及其诱变筛选方法和应用。

背景技术

阿拉伯糖醇(D-arabitol)，是一种天然的五碳多元糖醇，其分子式为C₅H₁₂O₅，分子量 152.15。D-阿拉伯糖醇是一种重要的功能性食品添加剂，其具有热量低、能够抑制致龋细菌生长、可作为合成药物或高附加值化学品的中间物等特点，在食品、医药、化工等众多领域的发展前景十分广阔。

目前，阿拉伯糖醇的生产方法有自然提取法、化学合成法和生物合成法。自然提取法底物昂贵，提取过程难度较大，在经济和产量上无法满足需求。化学合成法需要昂贵的催化剂、较高的能源消耗、严苛的实验条件以及高成本的生产设备，此外还存在环境污染的问题，这使得D-阿拉伯糖醇的生产难以满足各领域的市场需求。生物法利用微生物将来源广泛、价格低廉的底物如葡萄糖等转化为D-阿拉伯糖醇的过程。这种方法的优势在于，经济成本低廉，生产过程无需高温高压等严格条件，不产生对环境有害的废弃物，可以实现较低成本的大规模工业生产，符合绿色可持续的健康发展理念。但是目前报道菌株中可运用到工厂生产的菌株较少，且优化产量的方式多为简单的发酵优化，对菌株生产能力提升有限。

发明内容

针对现有技术中存在的一些不足，本发明提供了一种鲁氏酵母及其诱变筛选方法和应用。本发明以能够代谢葡萄糖生产D-阿拉伯糖醇的鲁氏酵母(Zygosaccharomycesrouxii)为出发菌株，经过常压室温等离子体(Atmospheric and Room TemperaturePlasma,ARTP)诱变筛选得到了一株能够利用葡萄糖有效生产D-阿拉伯糖醇的突变株，有效提升了天然菌株的发酵能力。

本发明中首先提供了一种鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月14日，保藏地址为中国，武汉，保藏号为CCTCC NO：M 2022075。

进一步的，所述鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075在YPD平板的菌落形态呈现为规则的圆形白色单一菌株；所述鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075经ITS rDNA 分子生物学特征鉴定，属于Zygosaccharomyces rouxii M75。

本发明中还提供了一种诱变筛选上述鲁氏酵母的方法，具体包括如下步骤：

(1)菌株的活化：

以鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)为出发菌株，采用平板划线培养，挑取单菌落在液体培养基中活化培养；

(2)ARTP诱变处理：

将活化后的鲁氏酵母培养至对数期，收集后重悬稀释处理，然后对稀释后的鲁氏酵母进行ARTP诱变处理；

(3)诱变后的鲁氏酵母的培养：

将诱变处理后的鲁氏酵母震荡洗脱，洗脱后稀释，然后涂布于新鲜YPD平板上培养，挑取菌落形态良好的单菌落在液体培养基中活化；

(4)菌株的筛选：