[发明专利]一种鲁氏酵母及其诱变筛选方法和应用

权利要求书

1.一种鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075，为鲁氏酵母属，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2022年1月14日，保藏地址为中国武汉，保藏号为CCTCCNO：M 2022075。

2.根据权利要求1所述的鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075，其特征在于，所述鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075在YPD平板的菌落形态为规则的圆形白色单一菌株。

3.根据权利要求1所述的鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075，其特征在于，所述筛选方法为：

(1)菌株的活化：

以鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)为出发菌株，采用平板划线培养，挑取单菌落在液体培养基中活化培养；

(2)ARTP诱变处理：

将活化后的鲁氏酵母培养至对数期，收集后重悬稀释处理，然后对稀释后的鲁氏酵母进行ARTP诱变处理；

(3)诱变后的鲁氏酵母的培养：

将诱变处理后的鲁氏酵母震荡洗脱，洗脱后稀释，然后涂布于新鲜YPD平板上培养，挑取菌落形态良好的单菌落在液体培养基中活化；

(4)菌株的筛选：

将液体活化后的鲁氏酵母接种至发酵培养基中发酵，发酵结束后取发酵液加入碘硝基四氮唑(INT)溶液和pH 5.0的Tris-HCl缓冲液，置于37℃下暗处震荡，得到反应物，选取颜色比较明显的菌株保存；

(5)菌株的复筛：

将步骤(4)中保存的菌株活化，然后进行摇瓶发酵，发酵结束后取发酵液进行高效液相色谱(HPLC)分析，通过比较D-阿拉伯糖醇产量，筛选出产量较高的诱变菌株。

4.权利要求1所述的鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075在发酵生产D-阿拉伯糖醇中的应用。

5.一种D-阿拉伯糖醇的生产方法，其特征在于，所述方法为采用权利要求1所述鲁氏酵母(Zygosaccharomyces rouxii)M 075在培养基中发酵生产；

所述发酵生产的条件为：培养温度28-30℃、接种量为体积比3-5％、摇床转速180-200rpm、发酵时间为72-96h；

所述培养基为葡萄糖250-300g/L，酵母提取物10-12g/L，蛋白胨10-12g/L，硫酸铵1-3g/L，反丁烯二酸8-10g/L，Triton X-100接种量为体积分数1-2％。

6.根据权利要求5所述的D-阿拉伯糖醇的生产方法，其特征在于，所述发酵生产的条件为：培养温度30℃、接种量为体积比5％、摇床转速200rpm、发酵时间为96h。

7.根据权利要求5所述的D-阿拉伯糖醇的生产方法，其特征在于，所述培养基为：葡萄糖300g/L，酵母提取物12g/L，蛋白胨12g/L，硫酸铵1g/L，反丁烯二酸10g/L，Triton X-100接种量为体积分数1.5％。