[发明专利]22q11微缺失和/或微重复检测引物组、引物探针组合物、试剂盒及其应用

说明书

本申请涉及一种22q11微缺失和/或微重复检测引物组、引物探针组合物、试剂盒及其应用，其包括具有如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.24所示序列的12对引物P1‑P12。本申请针对染色体22q11微缺失和/或微重复，对序列进行分析，平衡各序列之间的稳定性、反应条件、扩增效率、灵敏性等因素，对染色体22q11进行区域划分，设计了12对引物和探针。在保证引物的扩增效率的同时，避免引物之间的交叉影响，同时具有极高的精确度。

技术领域

本发明涉及一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物组、引物探针组合物、试剂盒及其应用，属于核酸检测技术领域。

背景技术

22q11微缺失/微重复综合征是指22号染色体22q11.21～q11.23微小缺失/重复所造成的临床症候群。一般的发病概率为1/4000，男女发病无差异。这一段缺失/重复因涉及多个遗传性基因，不同的基因异常导致的临床综合征略有差异。主要有：DiGeorge综合征；腭心面综合征(velocardiofacial syndrome，VCFS)；先天性异常面容综合征等。微缺失/微重复的范围大约在1.5Mb至3Mb不一(覆盖基因20-30个)，一般来说该缺失/重复大部分为新发变异(占94％)，也有部分为遗传性(占6％)。

该微缺失/微重复综合征最主要临床表现有：心脏缺陷、胸腺发育不全、咽腭闭锁不全伴腭裂、甲状旁腺发育不全版低钙血症、异常面容等。但在生长发育和智力发育方面来说还算是正常的，通常有发育迟缓，身高、体重增长较正常人慢，智商位于正常范围，1/3有说话延迟，少部分有严重智力缺陷，在抽象理解能力方面有困难，解决问题的能力差，学习方面有困难。总体来说，大部分患者发育倾向于正常水平，学习有轻微障碍。

检测22q11微缺失/微重复的方法目前有多种，主要有染色体核型分析、限制性片段长度多态性检测、Southern杂交以及FISH、基因芯片技术等方法，其中以FISH方法最为灵敏、可靠，已被运用于临床诊断，但由于成本高、耗时长、技术难度高等原因，还不能成为大范围高危人群的筛查手段。染色体核型分析包括普通带型分析和高分辨技术，它不仅可以检测22q11微缺失/微重复，还可以同时观察其他的染色体异常，且技术成熟，操作简单，但检出率仅为10％～20％。基因芯片技术用gDNA克隆或cDNAs微阵列代替中期染色体铺片作为杂交靶，用微阵列每个靶点上的两种信号的荧光比例反映待测基因组DNA在相应的序列或基因上的拷贝数变化。此技术可以自动化操作，具有灵敏度和准确是高，实现了自动化和程序化等优点，但也存在价格高、需一定量的特殊设备及需要一定技术的专业人员进行操作等限制，不能被广泛的应用。由于以上技术都各自存在局限性，使其无法成为临床常用的或可信的诊断手段。微卫星DNA广泛分布于基因组中，具有高度多态性、遗传稳定性高等优点，在22q11区域内选取这些微卫星DNA标记，进行PCR扩增，可以快速、低成本的检出微小缺失/重复，并大致界定缺失范围。但缺点是必须有双亲的DNA样本，多态信息量不高时难以下诊断性结论；并且在进行PCR扩增时，存在等位基因丢失现象，需要反复验证结果，因此经典的PCR-STR方法是一种快速筛查方法，但对筛查出的阳性病例还需用FISH、基因芯片技术等其它检测方法进一步确诊。

发明内容

本发明的目的在于提供一种22q11微缺失和/或微重复检测引物组、引物探针组合物、试剂盒及其应用，能以较低的成本精准地进行22q11微缺失和/或微重复得检测。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

第一方面，本申请提供一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物组，所述引物组包括12对引物：

P1，包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的上游引物和下游引物；

P2，包括如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的上游引物和下游引物；

P3，包括如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的上游引物和下游引物；